Chapitre III
Matériel et méthodes
39
4. Analyses Microbiologiques
L’objectif est de rechercher les germes pathogènes qui accompagnent les indicateurs de
contamination fécale, à savoir les coliformes totaux, fécaux, streptocoques fécaux, et les
Clostridiums sulfito-réducteurs.
L’examen bactériologique est effectué sur un échantillon correctement prélevé, dans des flacons
stérile, selon un mode opératoire précis évitant toute contamination accidentelle, correctement
transportés au laboratoire et analysé après une courte durée de conservation dans des conditions
satisfaisantes (Maul, 1997).
Les échantillons sont prélevés dans des flacons de verre de 500 ml, stérilisés
à l’autoclave à 120°C pendant 20 minutes.
Les échantillons sont transportés dans une glacière isotherme (4°C) à l’abri
de la lumière.
4.1. Dénombrement bactérien dans la matrice eau
La méthode de filtration sur membrane est la méthode de concentration la plus utilisée au
laboratoire, du fait de sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste à recueillir, sur une membrane
stérile un volume donné d’eau à analyser, la membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif
convenable ; après incubation, les colonies sont identifiées et dénombrées (Champiat et al , 1994).
-Matériel
- Dispositif de filtration.
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile.
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe.
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel)
de porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir les bactéries ;
- Deux Incubateurs (Etuves) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et Pipettes.
Mode opératoire
En présence du bec bunsen et sur une paillasse javellisée (Rodier, 1984)
-Stériliser le dispositif de filtration.
-Mettre en place le dispositif.
-Mettre le filtre sur la grille.
-Filtrer un volume d’échantillon (100ml).
-Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie recherchée.
-Incuber les boites à la température adéquate.
Matériel et méthodes
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4. Analyses Microbiologiques
L’objectif est de rechercher les germes pathogènes qui accompagnent les indicateurs de
contamination fécale, à savoir les coliformes totaux, fécaux, streptocoques fécaux, et les
Clostridiums sulfito-réducteurs.
L’examen bactériologique est effectué sur un échantillon correctement prélevé, dans des flacons
stérile, selon un mode opératoire précis évitant toute contamination accidentelle, correctement
transportés au laboratoire et analysé après une courte durée de conservation dans des conditions
satisfaisantes (Maul, 1997).
Les échantillons sont prélevés dans des flacons de verre de 500 ml, stérilisés
à l’autoclave à 120°C pendant 20 minutes.
Les échantillons sont transportés dans une glacière isotherme (4°C) à l’abri
de la lumière.
4.1. Dénombrement bactérien dans la matrice eau
La méthode de filtration sur membrane est la méthode de concentration la plus utilisée au
laboratoire, du fait de sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste à recueillir, sur une membrane
stérile un volume donné d’eau à analyser, la membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif
convenable ; après incubation, les colonies sont identifiées et dénombrées (Champiat et al , 1994).
-Matériel
- Dispositif de filtration.
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile.
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe.
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage individuel)
de porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir les bactéries ;
- Deux Incubateurs (Etuves) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et Pipettes.
Mode opératoire
En présence du bec bunsen et sur une paillasse javellisée (Rodier, 1984)
-Stériliser le dispositif de filtration.
-Mettre en place le dispositif.
-Mettre le filtre sur la grille.
-Filtrer un volume d’échantillon (100ml).
-Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie recherchée.
-Incuber les boites à la température adéquate.