Chapitre Ш
Matériel et méthodes
52
Ш.3. Techniques de caractérisation de bactéries recherchées
Pour mieux caractériser le profil biochimique et morphologique des bactéries
recherchées, qui appartiennent aux groupes des coliformes, streptocoques fécaux, salmonelle,
vibrions et staphylocoques, une série de tests à été réalisé, il s’agit de :
a- Coloration de Gram
C’est un test signalé par Christian Gram en 1884 et reste utilisable jusqu’à l’heure
actuelle. Il permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram (+) et les Gram (-).
Le premier se colore en violet et le second en rose. Elle se base sur les différences dans la
structure de la paroi de ces deux groupes Gram (+) et Gram (-).
La paroi des Gram (-) semble contenir 20% de lipides qui se dissolvent dans l’alcool
augmentant ainsi la perméabilité cellulaire, ce qui facilite l’élimination du colorant violet du
cytoplasme. La fuschine, colorant basique, permettra au Gram (-) d’acquérir une nouvelle
coloration rose.
La paroi des Gram (+) ne contient que 5% de lipides, l’alcool entraine l’élimination d’eau et
rétrécissement des pores et donc la rétention du violet de Gentiane au niveau du cytoplasme.
Mode opératoire
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de
Gentiane, puis rincé rapidement avec une solution de Lugol (02 fois 20 sec).
Le frottis est ensuit décoloré avec l’alcool à 95% pendant 45 secondes jusqu’à ce que l’excès
de colorant soit éliminé.
Le frottis est rincé immédiatement à l’eau sous un robinet puis soumis à une coloration avec
une solution de Fuschine. On rince rapidement à l’eau et on sèche (Singleton et Sainsburg,
1984).
b- Test de catalase
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) qui est produit
par certaines réactions cellulaires et qui est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes
chargée d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (Pelmont, 1993 ; in Aichiou et
Echchatabi, 2006).
La réaction catalysée est la suivante :
2 H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O
Matériel et méthodes
52
Ш.3. Techniques de caractérisation de bactéries recherchées
Pour mieux caractériser le profil biochimique et morphologique des bactéries
recherchées, qui appartiennent aux groupes des coliformes, streptocoques fécaux, salmonelle,
vibrions et staphylocoques, une série de tests à été réalisé, il s’agit de :
a- Coloration de Gram
C’est un test signalé par Christian Gram en 1884 et reste utilisable jusqu’à l’heure
actuelle. Il permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram (+) et les Gram (-).
Le premier se colore en violet et le second en rose. Elle se base sur les différences dans la
structure de la paroi de ces deux groupes Gram (+) et Gram (-).
La paroi des Gram (-) semble contenir 20% de lipides qui se dissolvent dans l’alcool
augmentant ainsi la perméabilité cellulaire, ce qui facilite l’élimination du colorant violet du
cytoplasme. La fuschine, colorant basique, permettra au Gram (-) d’acquérir une nouvelle
coloration rose.
La paroi des Gram (+) ne contient que 5% de lipides, l’alcool entraine l’élimination d’eau et
rétrécissement des pores et donc la rétention du violet de Gentiane au niveau du cytoplasme.
Mode opératoire
Un frottis fixé à la chaleur est coloré pendant une minute avec une solution de violet de
Gentiane, puis rincé rapidement avec une solution de Lugol (02 fois 20 sec).
Le frottis est ensuit décoloré avec l’alcool à 95% pendant 45 secondes jusqu’à ce que l’excès
de colorant soit éliminé.
Le frottis est rincé immédiatement à l’eau sous un robinet puis soumis à une coloration avec
une solution de Fuschine. On rince rapidement à l’eau et on sèche (Singleton et Sainsburg,
1984).
b- Test de catalase
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) qui est produit
par certaines réactions cellulaires et qui est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes
chargée d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (Pelmont, 1993 ; in Aichiou et
Echchatabi, 2006).
La réaction catalysée est la suivante :
2 H 2 O 2
O 2 + 2H 2 O