Chapitre Ш
Matériel et méthodes
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Ш.2.2.4.2. Appareillage
 Dispositif de filtration
La filtration est effectuée sous vide léger en utilisant des filtres en fibre verre (GF/F,
0,45 μm).
 Tubes de mesure
Pour l’extraction, on utilise des tubes en verre avec bouchon enveloppés au préalable
avec du papier aluminium pour éviter l’exposition des filtres à la lumière.
 Centrifugeuse
Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porte-Filtre.
 Spectrophotomètre fluorescence
L’appareil utilisé pour la mesure de la chlorophylle est un spectrophotomètre de
Fluorescence HITACHI, modèle 650 S, équipé d’une lampe « Xénon » qui est la source du
rayonnement UV et des cellules en quartz de 1 cm de trajet optique (Fig.16 annexe I).
Le mode opératoire détaillé pour le dosage de la chlorophylle a ainsi que les réactifs et les
standards utilisés sont consignés en annexe I.
Les concentrations de la chlorophylle a sont évaluées d’après les formules de Lorenzen
(1966) (in Aminot et Chaussepied, 1983):
Pour la chlorophylle a, elle est calculée d'après la formule suivante qui néglige la
présence des phéopigments:
Avec :
 IF0 : Intensité de fluorescence avant acidification (U.A) ;
 IFa : Intensité de fluorescence après acidification (U.A) ;
 K0 : Coefficient d'étalonnage établie avec de la chlorophylle a pure avant acidification
[Chlorophylle a] (µg/l) = —— * ——
[Phéopigments a] (µg/l) = ———— * ——
IF 0 – If a
K 0 – K a
VE
VF
IF 0
K 0
0
VE
VF