I
Annexe I:
Milieux de culture et réactifs
1. Technique de préparation d’un milieu de culture
La préparation classique d’un milieu de culture passe par les étapes suivantes :
 La lecture et interprétation de la formule de préparation.
 Rassembler les différents constituants.
 La pesée.
 Dissolution avec ajustement du volume exacte.
 Ajustement du pH.
 La filtration c’est facultatif.
 La répartition.
La stérilisation des milieux de culture se fait à l’autoclave 121°C pendant 15 minutes,
120°C pendant 20 minutes (Pour les milieux stérilisables).
2. Composition des milieux de culture et réactifs :
Formules indiquées en gramme par litre d'eau distillée
Eau peptonée tamponnée (E.P.T)
Formule:
 Mélange de peptones…………………………………………………..……...... 10,0
 Chlorure de sodium……………………………………………………………..5,0
 Di-sodium hydrogénophosphate…………………………………………….....3, 5
 Dihydrogénophosphate de potassium……………………………………………. 1,5
PH final= 7,2à 25
o
C
Autoclaver 20 minutes à120
o
C
Eau peptonée salée alcaline (EPSA)
Formule :
 Peptone…………………………………………………………………………..20
 Chlorure de sodium……………………………………………………………….5
PH= 8.2
Additionné 40% de Chlorure de sodium pour obtenir une solution hypersalée.
Autoclaver 15 minutes à 120
o
C.
Eau peptonée exempte d’indole (EPI)
Formule :
 Peptone exempte d’indole…………………………………………………………15
PH= 7.2 à 25
o
C
Répartir en tubes à essais (9ml) et autoclaver 15 minutes à 120
o
C.