Matériel et méthodes
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II.2.2.7. Electrophorèse sur gel d’agarose :
Les produits d’amplification sont soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose
(20X10cm) de 2% pour les Qnr et 1% pour le gène QepA et aac-Ib, sous une tension de 90V
pendant 20minutes. La visualisation se fait sous UV en utilisant le bromure d’ethidium
(0,5μg/ml).
Cette méthode a pour principe la séparation, l’identification et la purification de l’ADN
chargé négativement. La migration de l’ADN dans le gel d’agarose, soumis à un champ
électrique dépend des paramètres suivants (Sambrook et al., 1989) : le poids moléculaire, la
concentration d’agarose dans le gel, la conformation de l’ADN, le voltage appliqué et la
composition du tampon d’électrophorèse.
Technique
 préparation d’un gel d’agarose(1 ou 2%) dans du tampon TBE 1X, additionné de
bromure d’ethidium (0.5μg/ml);
 déposer l’échantillon à analyser dans le gel
 appliquer un champ électrique à un voltage de 5V/cm;
 visualiser l’ADN sous UV a 254nm.
Solution employée :
Tampon TBE 10X (pH 8,3, autoclave et conservé à température ambiante) :
890mM de tris base.
890mM d’acide borique.
19 mM d’EDTA.