MATERIEL ET METHODES
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Tableau 4 : Les séquences des amorces utilisées pour la recherche du gène CTX-M et
TEM (Kim et al., 2004).
Gènes
Amorces
Taille du
fragment
(pb)
Température
d’hybridation
CTX-M
Up : GGTTAAAAAATCACTGCGTC
Low: TTGGTGACGATTTTAGCCGC
550
55°C
II.3.1.7. Electrophorèse sur gel d’agarose
L’électrophorèse sur gel d’agarose a pour principe la séparation, l’identification et la
purification de l’ADN chargé négativement. La migration de l’ADN dans le gel d’agarose,
soumis à un champ électrique dépend des paramètres suivants: le poids moléculaire, la
concentration d’agarose dans le gel, la conformation de l’ADN, le voltage appliqué et la
composition du tampon d’électrophorèse.(Sambrook et al., 1989).
Technique
préparation d’un gel d’agarose (1,2%) dans du tampon TBE 1X, additionné de
Bromure d’ethidium (0.5μg/ml);
déposer l’échantillon à analyser dans le gel ;
appliquer un champ électrique à un voltage de 5V/cm;
visualiser l’ADN sous UV à 254nm.
Solution employée :
Tampon TBE 10X (pH 8,3, autoclave et conservé à température ambiante) :
- 890mM de tris base.
- 890mM d’acide borique.
- 19mM d’EDTA.
Bleu de dépôt :
- Glycérol 50%
- EDTA-NA2 100mM pH : 8
- Sodium dodecyl sulfate (SDS) 3%