MATERIEL ET METHODES
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déshydratée. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue
les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des
virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions
se fait à l'aide du tableau de lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue
Analytique ou d'un logiciel d'identification. (Biomerieux).
Technique
-Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et repartir environ 5ml d’eau distillée
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide ;
-Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation ;
- Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau distillée stérile ;
-Inoculer la galerie comme suit :
o Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
o Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
o Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en remplissant
leur cupule d’huile de vaseline;
- Incuber à 37°C pendant 24-48heures;
- Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque d’oxydase
contenant l’oxalate de diméthyle-paraphényléne-diamine. La présence du cytochrome
oxydase se traduit par l’apparition d’une coloration violette.
Lecture
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après
codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant
à un catalogue analytique (Biomérieux).
II.3.1.3. Diffusion en milieu gélose : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 17 antibiotiques a été réalisée
parla méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2010).
Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélose (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
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déshydratée. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue
les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des
virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions
se fait à l'aide du tableau de lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue
Analytique ou d'un logiciel d'identification. (Biomerieux).
Technique
-Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et repartir environ 5ml d’eau distillée
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide ;
-Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation ;
- Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau distillée stérile ;
-Inoculer la galerie comme suit :
o Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
o Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
o Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en remplissant
leur cupule d’huile de vaseline;
- Incuber à 37°C pendant 24-48heures;
- Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque d’oxydase
contenant l’oxalate de diméthyle-paraphényléne-diamine. La présence du cytochrome
oxydase se traduit par l’apparition d’une coloration violette.
Lecture
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après
codification des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant
à un catalogue analytique (Biomérieux).
II.3.1.3. Diffusion en milieu gélose : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 17 antibiotiques a été réalisée
parla méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2010).
Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélose (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour du disque d’antibiotique.