Chapitre III
Matériel et méthodes d’analyse
45
d) Triple Sugar Iron (TSI)
Principe
Déterminer la capacité de la bactérie d'utiliser plus d'un des sucres (glucose, lactose ou
sucrose), avec ou sans production de gaz, et de produire du sulfure d'hydrogène (H 2 S).
Technique
- En partant d'une colonie, inoculer le culot en piquant avec un fil droit au centre puis
inoculer la pente en effectuant une strie sinueuse.
- Incuber à 37°C jusqu'au lendemain.
Résultats
- Fermentation du glucose seulement: culot jaune et pente rouge.
- Fermentation du glucose et un des deux autres sucres (lactose ou sucrose): culot et
pente jaune.
- Aucun sucre dégradé: pente rouge et culot rouge ou orange.
- Production de gaz: bulle(s) de gaz, milieu complètement séparé ou soulevé.
- Production de H 2 S: précipité noirâtre plus ou moins abondant
e) Identification biochimique : Galeries API 20 E
L’identification des bactéries est en grande partie basée sur la mise en évidence de leurs
caractères biochimiques, qui constituent souvent la plus grande partie de la galerie
d’identification (Beraud, 2004).
Dans la présente étude, on a utilisé la galerie API 20 E spéciale pour les
Enterobacteriaceae. Le mode opératoire est bien détaillé en annexe.
f) Recherche de la coagulase
Ce test sert à déterminer si la bactérie est capable de coaguler le plasma par l'action de
l'enzyme coagulase.
Mode opératoire
-Mettre dans un tube à hémolyse 4
gouttes de plasma humain et 5 colonies
suspectés
- Incubation 37°C 18 à 24H
-Des lectures sont effectuées chaque 2
heures.
-Tube positif :
Coagulase (+).
- Tube négatif :
Coagulase (-).
Matériel et méthodes d’analyse
45
d) Triple Sugar Iron (TSI)
Principe
Déterminer la capacité de la bactérie d'utiliser plus d'un des sucres (glucose, lactose ou
sucrose), avec ou sans production de gaz, et de produire du sulfure d'hydrogène (H 2 S).
Technique
- En partant d'une colonie, inoculer le culot en piquant avec un fil droit au centre puis
inoculer la pente en effectuant une strie sinueuse.
- Incuber à 37°C jusqu'au lendemain.
Résultats
- Fermentation du glucose seulement: culot jaune et pente rouge.
- Fermentation du glucose et un des deux autres sucres (lactose ou sucrose): culot et
pente jaune.
- Aucun sucre dégradé: pente rouge et culot rouge ou orange.
- Production de gaz: bulle(s) de gaz, milieu complètement séparé ou soulevé.
- Production de H 2 S: précipité noirâtre plus ou moins abondant
e) Identification biochimique : Galeries API 20 E
L’identification des bactéries est en grande partie basée sur la mise en évidence de leurs
caractères biochimiques, qui constituent souvent la plus grande partie de la galerie
d’identification (Beraud, 2004).
Dans la présente étude, on a utilisé la galerie API 20 E spéciale pour les
Enterobacteriaceae. Le mode opératoire est bien détaillé en annexe.
f) Recherche de la coagulase
Ce test sert à déterminer si la bactérie est capable de coaguler le plasma par l'action de
l'enzyme coagulase.
Mode opératoire
-Mettre dans un tube à hémolyse 4
gouttes de plasma humain et 5 colonies
suspectés
- Incubation 37°C 18 à 24H
-Des lectures sont effectuées chaque 2
heures.
-Tube positif :
Coagulase (+).
- Tube négatif :
Coagulase (-).