2
éme partie : Matériels et méthodes
I- Matériels .......................................................................................................................... 19
II- Méthodes ........................................................................................................................ 19
II-1- Identification et entretien des microalgues ...................................................... 19
II-1-1- Identification des microalgues.......................................................... 19
II-1-2- Entretien des souches ....................................................................... 20
II-2- Purification des souches .................................................................................. 20
II-2-1- Choix du milieu de culture ............................................................... 20
II-2-2- Choix du mode de nutrition .............................................................. 21
II-2-3- Purification des souches de microalgues .......................................... 21
II-2-3-1- Traitement par dilution ...................................................... 21
II-2-3-2- Traitement par les antibiotiques ........................................ 22
II-3- Les étapes de la culture des microalgues ......................................................... 24
II-3-1- Mode de culture entrepris ................................................................. 24
II-3-2- Culture axénique............................................................................... 24
II-3-3- Choix des conditions d’incubations ................................................. 25
II-4- Analyse biométrique de la culture .................................................................. 27
II-4-1- Densité optique ................................................................................. 27
II-4-2- Comptage du nombre de cellules ..................................................... 27
II-4-3- Dosage des chlorophylles ................................................................. 28
II-5- Calcul du taux de croissance spécifique .......................................................... 29
II-6- La récolte ........................................................................................................ 30
II-6-1- Centrifugation ................................................................................... 30
II-6-1- Filtration ........................................................................................... 30
II-7- Lyophilisation .................................................................................................. 31
II-8- Analyse biochimique ....................................................................................... 32
II-8-1- Dosage des lipides ............................................................................ 33
II-8-2- Dosage des protéines ........................................................................ 34
II-8-3- Dosage des sucres totaux ................................................................. 35
3
éme partie : Résultats et discussions
I- Identification des souches ................................................................................................ 38
I-1- Espèce Chlamydomonas sp .............................................................................. 38
I-2- Espèce Scenedesmus sp ................................................................................... 38
II- Culture des microalgues ................................................................................................. 39
II-1- Choix du milieu de culture .............................................................................. 39
II-2- Résultats des étapes de purification entreprises pour la mise en route d’une
culture axénique ....................................................................................................... 41
II-2-1- Résultats du traitement par dilution.................................................. 41
II-2-2- Résultats du traitement par les antibiotiques ................................... 42
III- Résultats du suivi des cultures ...................................................................................... 43
III-1- Cinétique de croissance de Chlamydomonas sp cultivée en milieu TAP ..... 43
III-2- Cinétique de croissance de Scenedesmus sp cultivée en milieu 6NBBM+G . 45
IV- Détermination de taux de croissance spécifique ........................................................... 47
V- Analyse biochimique ...................................................................................................... 48
V-1- Dosage des lipides ........................................................................................... 48
V-2- Dosage des protéines ....................................................................................... 48
éme partie : Matériels et méthodes
I- Matériels .......................................................................................................................... 19
II- Méthodes ........................................................................................................................ 19
II-1- Identification et entretien des microalgues ...................................................... 19
II-1-1- Identification des microalgues.......................................................... 19
II-1-2- Entretien des souches ....................................................................... 20
II-2- Purification des souches .................................................................................. 20
II-2-1- Choix du milieu de culture ............................................................... 20
II-2-2- Choix du mode de nutrition .............................................................. 21
II-2-3- Purification des souches de microalgues .......................................... 21
II-2-3-1- Traitement par dilution ...................................................... 21
II-2-3-2- Traitement par les antibiotiques ........................................ 22
II-3- Les étapes de la culture des microalgues ......................................................... 24
II-3-1- Mode de culture entrepris ................................................................. 24
II-3-2- Culture axénique............................................................................... 24
II-3-3- Choix des conditions d’incubations ................................................. 25
II-4- Analyse biométrique de la culture .................................................................. 27
II-4-1- Densité optique ................................................................................. 27
II-4-2- Comptage du nombre de cellules ..................................................... 27
II-4-3- Dosage des chlorophylles ................................................................. 28
II-5- Calcul du taux de croissance spécifique .......................................................... 29
II-6- La récolte ........................................................................................................ 30
II-6-1- Centrifugation ................................................................................... 30
II-6-1- Filtration ........................................................................................... 30
II-7- Lyophilisation .................................................................................................. 31
II-8- Analyse biochimique ....................................................................................... 32
II-8-1- Dosage des lipides ............................................................................ 33
II-8-2- Dosage des protéines ........................................................................ 34
II-8-3- Dosage des sucres totaux ................................................................. 35
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éme partie : Résultats et discussions
I- Identification des souches ................................................................................................ 38
I-1- Espèce Chlamydomonas sp .............................................................................. 38
I-2- Espèce Scenedesmus sp ................................................................................... 38
II- Culture des microalgues ................................................................................................. 39
II-1- Choix du milieu de culture .............................................................................. 39
II-2- Résultats des étapes de purification entreprises pour la mise en route d’une
culture axénique ....................................................................................................... 41
II-2-1- Résultats du traitement par dilution.................................................. 41
II-2-2- Résultats du traitement par les antibiotiques ................................... 42
III- Résultats du suivi des cultures ...................................................................................... 43
III-1- Cinétique de croissance de Chlamydomonas sp cultivée en milieu TAP ..... 43
III-2- Cinétique de croissance de Scenedesmus sp cultivée en milieu 6NBBM+G . 45
IV- Détermination de taux de croissance spécifique ........................................................... 47
V- Analyse biochimique ...................................................................................................... 48
V-1- Dosage des lipides ........................................................................................... 48
V-2- Dosage des protéines ....................................................................................... 48