Matériels et Méthodes
II-3- Les étapes de la Culture des microalgues :
II-3-1- Mode de culture entrepris :
On a choisi la culture en batch pour suivre le développement et la croissance de nos
cellules microalgales dans leurs milieux de culture.
Les souches pures des espèces de microalgues commencent à se multiplier dans de
petits volumes et passent par différentes étapes jusqu'à la production en masse. Chaque
étape implique une augmentation de volume de culture (Lavens et al., 1996).
II-3-2- Culture axénique :
Inoculation initiale :
A partir d’une boite de pétri contenant des microalgues pures, on a introduit des
colonies dans des tubes à essai contenant 10 ml de milieu de culture liquide.
Selon la concentration d'algues, le volume de l'inoculum, correspond de manière
générale à 2-10% du volume final de la culture (Lavens et al., 1996).
Procédure de la culture :
Après une incubation de 5jours, les tubes contenant l’inoculum servent à
l’ensemencement des Erlenmeyers de 250 ml contenant 200 ml du milieu de culture. Ces
derniers sont incubés 5 à 7 jours, et ils sont utilisés par la suite comme inoculum dans des
Erlenmeyers de 1litre contenant 600 ml de milieu de culture. Un Erlenmeyer de 1litre est
utilisée pour continuer la culture dans un jerrican de 5 litres, et l’autre est utilisée pour faire
des analyses. La Figure 12 résume tous les étapes de la culture.
Le repiquage se fait en zone stérile, à la flamme (bec benzen), avec désinfection
préalable à l’alcool des mains, la paillasse, des goulots des tubes et Erlenmeyers.
Les tubes et les Erlenmeyers servant au repiquage sont remplis avec de milieu de
culture. Ils sont ensuite bouchés avec du coton et fermé avec du papier aluminium.
Le tous a été autoclavé à 120°C pendant 10min. Une stérilisation de l’ensemble est
indispensable pour éviter toute contamination.
Un contrôle régulier sous microscope optique permet de s’assurer du non
contamination des souches par d’autres souches ou par des bactéries, du fait d’une
mauvaise stérilisation ou d’une erreur de manipulation- transfert de contamination.
Page | 24
II-3- Les étapes de la Culture des microalgues :
II-3-1- Mode de culture entrepris :
On a choisi la culture en batch pour suivre le développement et la croissance de nos
cellules microalgales dans leurs milieux de culture.
Les souches pures des espèces de microalgues commencent à se multiplier dans de
petits volumes et passent par différentes étapes jusqu'à la production en masse. Chaque
étape implique une augmentation de volume de culture (Lavens et al., 1996).
II-3-2- Culture axénique :
Inoculation initiale :
A partir d’une boite de pétri contenant des microalgues pures, on a introduit des
colonies dans des tubes à essai contenant 10 ml de milieu de culture liquide.
Selon la concentration d'algues, le volume de l'inoculum, correspond de manière
générale à 2-10% du volume final de la culture (Lavens et al., 1996).
Procédure de la culture :
Après une incubation de 5jours, les tubes contenant l’inoculum servent à
l’ensemencement des Erlenmeyers de 250 ml contenant 200 ml du milieu de culture. Ces
derniers sont incubés 5 à 7 jours, et ils sont utilisés par la suite comme inoculum dans des
Erlenmeyers de 1litre contenant 600 ml de milieu de culture. Un Erlenmeyer de 1litre est
utilisée pour continuer la culture dans un jerrican de 5 litres, et l’autre est utilisée pour faire
des analyses. La Figure 12 résume tous les étapes de la culture.
Le repiquage se fait en zone stérile, à la flamme (bec benzen), avec désinfection
préalable à l’alcool des mains, la paillasse, des goulots des tubes et Erlenmeyers.
Les tubes et les Erlenmeyers servant au repiquage sont remplis avec de milieu de
culture. Ils sont ensuite bouchés avec du coton et fermé avec du papier aluminium.
Le tous a été autoclavé à 120°C pendant 10min. Une stérilisation de l’ensemble est
indispensable pour éviter toute contamination.
Un contrôle régulier sous microscope optique permet de s’assurer du non
contamination des souches par d’autres souches ou par des bactéries, du fait d’une
mauvaise stérilisation ou d’une erreur de manipulation- transfert de contamination.
Page | 24