Matériels et Méthodes
A partir d’un tube à essai contenant des microalgues dans leurs milieux de culture, des
dilutions seront faite dans de l’eau physiologique.
Marquer les tubes de diluant de (10
-1 jusqu’à 10
-6 ).
Prélever aseptiquement 1ml de la suspension mère à l’aide d’une pipette graduée
stérile munie d’une paroi à aspiration : l’homogénéisation du prélèvement se fait
par aspiration et refoulement trois fois (Norme NF ISO 7218).
Transférer aseptiquement le ml prélevé dans le premier tube 10
-1 , la pipette ne doit
pas pénétrer dans les 9 ml de l’eau physiologique.
A l’aide d’une deuxième pipette stérile procéder de la même façon du tube 10
-1 au
tube 10
-2 .
Faire la même pour les quatre derniers tubes, en utilisant à chaque prélèvement une
pipette nouvelle.
Déposer sur une boite de Pétri contenant un milieu nutritif gélosé, 0.1 ml de
chacune des dilutions indiquées.
Etaler avec l'étaloire de façon uniforme par un mouvement de balayage et de
rotation sur l'ensemble de la surface de la gélose (ne pas ratisser la surface de la
gélose).
Laisser sécher les boites 10 min, les déposer ensuite à l'étuve et incuber à 37°C.
Le dénombrement des colonies bactériennes a été effectué après 24 à 48 heures
(Bonnefoy et al., 2002).
II-2-2-2- Traitement par les antibiotiques :
Il a été adopté la procédure décrite par hoshaw et Rosowski (1973) pour le
traitement par les antibiotiques.
Etape 1 : préparation de la solution d’antibiotiques.
Immédiatement avant l'utilisation, on dissout 100 mg de pénicilline G (sel de Na) et
50mg de sulfate de streptomycine dans 10 ml d'eau distillée. On ajoute ensuite10 mg de
chloramphénicol, dissous dans 1 ml d'éthanol 95% et on mélange bien. La stérilisation de
la solution préparée a été effectuée en faisant passer doucement la solution à travers un
filtre à membrane stérile de 0,22 μm (Figure 10.a) et la collecte du filtrat se fait dans un
flacon stérile de 100 ml (Stein, 1973).
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A partir d’un tube à essai contenant des microalgues dans leurs milieux de culture, des
dilutions seront faite dans de l’eau physiologique.
Marquer les tubes de diluant de (10
-1 jusqu’à 10
-6 ).
Prélever aseptiquement 1ml de la suspension mère à l’aide d’une pipette graduée
stérile munie d’une paroi à aspiration : l’homogénéisation du prélèvement se fait
par aspiration et refoulement trois fois (Norme NF ISO 7218).
Transférer aseptiquement le ml prélevé dans le premier tube 10
-1 , la pipette ne doit
pas pénétrer dans les 9 ml de l’eau physiologique.
A l’aide d’une deuxième pipette stérile procéder de la même façon du tube 10
-1 au
tube 10
-2 .
Faire la même pour les quatre derniers tubes, en utilisant à chaque prélèvement une
pipette nouvelle.
Déposer sur une boite de Pétri contenant un milieu nutritif gélosé, 0.1 ml de
chacune des dilutions indiquées.
Etaler avec l'étaloire de façon uniforme par un mouvement de balayage et de
rotation sur l'ensemble de la surface de la gélose (ne pas ratisser la surface de la
gélose).
Laisser sécher les boites 10 min, les déposer ensuite à l'étuve et incuber à 37°C.
Le dénombrement des colonies bactériennes a été effectué après 24 à 48 heures
(Bonnefoy et al., 2002).
II-2-2-2- Traitement par les antibiotiques :
Il a été adopté la procédure décrite par hoshaw et Rosowski (1973) pour le
traitement par les antibiotiques.
Etape 1 : préparation de la solution d’antibiotiques.
Immédiatement avant l'utilisation, on dissout 100 mg de pénicilline G (sel de Na) et
50mg de sulfate de streptomycine dans 10 ml d'eau distillée. On ajoute ensuite10 mg de
chloramphénicol, dissous dans 1 ml d'éthanol 95% et on mélange bien. La stérilisation de
la solution préparée a été effectuée en faisant passer doucement la solution à travers un
filtre à membrane stérile de 0,22 μm (Figure 10.a) et la collecte du filtrat se fait dans un
flacon stérile de 100 ml (Stein, 1973).
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