Chapitre III
Matériel et méthodes
43
• L’excitation : l’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette
est un phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers
une orbitale antiliante. La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un
état excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La
radiation ultraviolette de même que la lumière visible, possède suffisamment d’énergie pour
transférer des électrons vers des orbitales antiliante créant ainsi un état électronique excité.
• L’émission : le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est
relativement stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune
l’émission d’une radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le
spectre d’émission du rayonnement de fluorescence. L’intensité de la fluorescence est
proportionnelle à la concentration de l’échantillon à condition que cette dernière soit comprise
dans la gamme étalon. Cette technique s’applique en particulier aux molécules possédant des
liaisons doubles conjuguées tels que les hydrocarbures aromatiques et polyaromatiques.
III.3.1.2. Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorométre HITACHI
modèle 650-10s, équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm à 20 nm et un
balayage allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules en quartz de 1 centimètre de
trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de 0,5ml d’échantillon est
suffisant à l’analyse.
III.3.1.3. Etalonnage et préparation des standards
La standardisation de l’appareil nécessite un hydrocarbure de comparaison ou étalon de
référence. Celui préconisé est le chrysène ou 1,2-benzophenanthrène (C 18 H 12 ).
La gamme étalon se compose de 1 mg de chrysène dissous dans 10 ml d’hexane soit
den10mg/100ml. On obtient une solution mère ou solution initiale.
Des volumes de : 200, 400, 600 et 800μl sont prélevés de la solution mère et dilués dans 10ml
d’hexane afin d’obtenir des solutions filles S1, S2, S3 et S4.S5.ou gamme étalon
Tableau VII : Concentrations des différents standards préparés à partir de la solution mère.
ETALON
S1
S2
S3
S4
S5
CONCENTRATION
(ug/ml)
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
Matériel et méthodes
43
• L’excitation : l’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette
est un phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers
une orbitale antiliante. La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un
état excité. L’ensemble des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La
radiation ultraviolette de même que la lumière visible, possède suffisamment d’énergie pour
transférer des électrons vers des orbitales antiliante créant ainsi un état électronique excité.
• L’émission : le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est
relativement stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune
l’émission d’une radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le
spectre d’émission du rayonnement de fluorescence. L’intensité de la fluorescence est
proportionnelle à la concentration de l’échantillon à condition que cette dernière soit comprise
dans la gamme étalon. Cette technique s’applique en particulier aux molécules possédant des
liaisons doubles conjuguées tels que les hydrocarbures aromatiques et polyaromatiques.
III.3.1.2. Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorométre HITACHI
modèle 650-10s, équipé d’une lampe à xénon avec des fentes de 1.5 nm à 20 nm et un
balayage allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules en quartz de 1 centimètre de
trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume minimal de 0,5ml d’échantillon est
suffisant à l’analyse.
III.3.1.3. Etalonnage et préparation des standards
La standardisation de l’appareil nécessite un hydrocarbure de comparaison ou étalon de
référence. Celui préconisé est le chrysène ou 1,2-benzophenanthrène (C 18 H 12 ).
La gamme étalon se compose de 1 mg de chrysène dissous dans 10 ml d’hexane soit
den10mg/100ml. On obtient une solution mère ou solution initiale.
Des volumes de : 200, 400, 600 et 800μl sont prélevés de la solution mère et dilués dans 10ml
d’hexane afin d’obtenir des solutions filles S1, S2, S3 et S4.S5.ou gamme étalon
Tableau VII : Concentrations des différents standards préparés à partir de la solution mère.
ETALON
S1
S2
S3
S4
S5
CONCENTRATION
(ug/ml)
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00