MATERIEL ET METHODES
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- déposer l’échantillon à analyser dans le gel ;
- appliquer un champ électrique à un voltage de 5V/cm;
- visualiser l’ADN sous UV à 254nm.
Solution employée :
Tampon TBE 10X (pH 8,3, autoclave et conservé à température ambiante) :
- 890mM de tris base.
- 890mM d’acide borique.
- 19mM d’EDTA.
Bleu de dépôt :
- Glycérol 50%
- EDTA-NA 2 100mM pH : 8
- Sodium dodecyl sulfate (SDS) 3%
3.3. Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 21 antibiotiques a été réalisée par la
méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2010).
Principe
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
radient de concentration d’antibiotiques, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélose (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant des halos
d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
Technique
-A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5McFarland.
-ajuster l’inoculum à 10
7
cellules/ml.
-plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10
7
cellules/ml;