CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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II.3.2.2.1. Recherche et dénombrement des bactéries dans l’eau par la technique MF :
 Matériel :
- Dispositif de filtration (Figure6).
- Bec-bunsen pour la stérilisation de la zone de travail.
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe.
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage
individuel) de porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptible de retenir les
bactéries.
- Incubateur (Etuve) dont la température est ajustée selon le germe étudié.
- Pompe à vide.
- Pinces stérilisées.
- Pipettes.
 Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite selon les
recommandations suivantes :
Devant un bec-bunsen et sur une paillasse javellisée ;
- Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration ;
- Flamber l’entonnoir, le support et la plaque poreuse de l’appareil puis refroidir avec de
l’eau ;
- A l’aide d’une pince flambée et refroidie, prélever une membrane stérile en la saisissant
par son bord extérieur et la déposer sur la plaque poreuse ;
- Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
- Verser dans chaque entonnoir un volume d’échantillon bien homogénéisé ;
- Appliquer le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
- Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur un
milieu adapté aux bactéries recherchées ;
- Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose.
- Inscrire sur la boite de Pétri le numéro de l’échantillon et le volume filtré ;
- Placer les boites de Pétri en position inverse pour empêcher la condensation sur les
membranes et les incubées à une température donnée et pendant une duré spécifique pour
chaque germe ;
- Flambage du dispositif par le bec-bunsen après chaque échantillon filtré, afin d’éviter
toute contamination possible.