4.2. Analyses bactériologiques :
Les germes test recherchés sont : les coliformes totaux, les coliformes fécaux, les
streptocoques fécaux, les staphylocoques, les sulfitoréducteurs, les salmonelles et les vibrions.
4.2.1. Méthodes de dénombrement et de recherche:
4.2.1.1.
Dénombrement et recherche de la flore contenue dans les
échantillons d’eau :
Dans notre étude nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour estimer la
charge bactérienne dans la zone d’étude. C’est la méthode de concentration la plus utilisée au
laboratoire, elle consiste en une filtration de l’eau sur des membranes de porosité 0,45µm
susceptibles de retenir les bactéries avec un quadrillage en surface facilitant les
dénombrements.
L’appareil de filtration est le même dispositif de filtration sous vide qu’on a utilisé pour les
MES.
Mode opératoire :
Devant un bec-Bunsen et après javellisation de la paillasse, flamber la face supérieure (plaque
poreuse) de l’appareil et laisser refroidir. Fermer le robinet du support. Prélever une
membrane stérile en la saisissant par son bord extérieur, avec une pince flambée et refroidie ;
la déposer sur la plaque poreuse. L’entonnoir- réservoir flambé et refroidi est placé au dessus
de la membrane, et assembler au support à l’aide d’un dispositif d’assemblage permettant
d’éviter toute fuite du liquide contenu dans le réservoir. Agiter soigneusement le flacon d’eau
de mer à analyser et verser l’eau, stérilement, dans le réservoir jusqu’au repère (50 ou 100 ml
selon le type d’analyse pratiqué). Mettre en marche la pompe et ouvrir le robinet du support
suffisamment pour laisser l’eau s’écouler lentement sous l’action du vide. Dès que la
membrane parait sèche, fermer le robinet, enlever le dispositif de fixation, prélever les
membranes à l’aide d’une pince flambée en la saisissant par son extrême bord, et l’introduire
sur le milieu de culture choisi et adapté aux types de bactéries recherchées. Inscrire sur la
boite de Pétri le numéro de l’échantillon, la date de manipulation, et le volume filtré. Placer
les boites de Pétri en position inverse et les incuber à une température donnée et pendant une
durée spécifique pour chaque germe.
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Les germes test recherchés sont : les coliformes totaux, les coliformes fécaux, les
streptocoques fécaux, les staphylocoques, les sulfitoréducteurs, les salmonelles et les vibrions.
4.2.1. Méthodes de dénombrement et de recherche:
4.2.1.1.
Dénombrement et recherche de la flore contenue dans les
échantillons d’eau :
Dans notre étude nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour estimer la
charge bactérienne dans la zone d’étude. C’est la méthode de concentration la plus utilisée au
laboratoire, elle consiste en une filtration de l’eau sur des membranes de porosité 0,45µm
susceptibles de retenir les bactéries avec un quadrillage en surface facilitant les
dénombrements.
L’appareil de filtration est le même dispositif de filtration sous vide qu’on a utilisé pour les
MES.
Mode opératoire :
Devant un bec-Bunsen et après javellisation de la paillasse, flamber la face supérieure (plaque
poreuse) de l’appareil et laisser refroidir. Fermer le robinet du support. Prélever une
membrane stérile en la saisissant par son bord extérieur, avec une pince flambée et refroidie ;
la déposer sur la plaque poreuse. L’entonnoir- réservoir flambé et refroidi est placé au dessus
de la membrane, et assembler au support à l’aide d’un dispositif d’assemblage permettant
d’éviter toute fuite du liquide contenu dans le réservoir. Agiter soigneusement le flacon d’eau
de mer à analyser et verser l’eau, stérilement, dans le réservoir jusqu’au repère (50 ou 100 ml
selon le type d’analyse pratiqué). Mettre en marche la pompe et ouvrir le robinet du support
suffisamment pour laisser l’eau s’écouler lentement sous l’action du vide. Dès que la
membrane parait sèche, fermer le robinet, enlever le dispositif de fixation, prélever les
membranes à l’aide d’une pince flambée en la saisissant par son extrême bord, et l’introduire
sur le milieu de culture choisi et adapté aux types de bactéries recherchées. Inscrire sur la
boite de Pétri le numéro de l’échantillon, la date de manipulation, et le volume filtré. Placer
les boites de Pétri en position inverse et les incuber à une température donnée et pendant une
durée spécifique pour chaque germe.
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