Chapitre II
Matériel et Méthodes
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Chaque tubule contient un substrat différent sur lequel le micro-organisme recherché va
réagir. Ils sont remplis d'une suspension bactérienne calibrée (de densité différente selon la
galerie).
Le mode opératoire suivi est :

Préparation de la galerie
 Mettre de l’eau distillée sur le fond de la boîte (partie alvéolée), toutes les alvéoles
doivent être remplies, éliminer l’excès d’eau en renversant la boîte au dessus de l’évier.
 Placer la galerie sur le fond de la boîte elle doit être manipulée avec la pince.
 Recouvrir la boîte avec son couvercle.

Préparation de l’inoculum
Réalisez une suspension de la souche à étudier. La suspension doit avoir une densité
suffisante (1 colonie dans 5 ml) figure 16.
Prélèvement d’une souche pure
Une colonie dans 5ml d’eau physiologique
Figure 16: Prélèvement d’une souche a partir de milieu EL.
 Ensemencement de la galerie API
Introduire la suspension bactérienne dans chaque tube à l’aide d’une pipette Pasteur stérile,
pointe appuyée à l’intérieur et sur le côté pour éviter la formation des bulles.
 Mode de remplissage
 Les substrats dont le sigle est encadré, la cupule doit aussi être remplie de manière à créer
un ménisque (A) .
 Les substrats dont le sigle est soulignés, la cupule doit être remplie d'huile de paraffine
(B ) soit pour créer l'anaérobiose (absence d'oxygène), soit pour maintenir en solution les
ions volatils produits par la réaction et ainsi assurer le virage de l'indicateur coloré de pH.