Chapitre II
Matériel et Méthodes
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2.4.2. Les techniques de caractérisation des germes recherchées
Afin de mieux caractériser le profil biochimique et morphologique des bactéries recherchées,
qui appartiennent aux groupes des coliformes, des staphylocoques et des salmonelles.
Une séries de tests a été effectuée, il s’agit de :
a)
Coloration de Gram
Elle est reliée principalement à la différence de structure chimique des parois cellulaire des
bactéries (Dellarras et Bernard., 2003).
Le protocole de coloration de Gram selon Dellarras (2007) est le suivant :
 Préparer un frottis d’une culture bactérienne pure.
 Recouvrir le frottis de violet de Gentiane ; laisser agir une minute ; rincer à l’eau
distillée.
 Verser du Lugol et le laisser agir pendant une minute ; rincer à l’eau distillée.
 Décolorer à l’alcool à 95%, entre 15 et 30 seconde ; rincer à l’eau distillée.
 Recolorer avec la Fushine pendant 10 à 30 secondes ; rincer à l’eau distillée.
 Sécher au –dessus de la flamme d’un bec benzène.
Avec cette coloration double, les bactéries Gram positif apparaissent en violet foncé tandis
que les bactéries Gram négatif sont colorées en rose ou en rouge.
b)
Test de catalase
La catalase est une enzyme présente chez la plus parts des bactéries aérobies strictes et
anaérobies facultatives. Elle permet de détruire des peroxydes formés au cours de réaction de
l’oxydation ( Dellarras et Bernard ., 2003) .
L’eau oxygénée formée est décomposée en présence de cette enzyme, en eau et en oxygène
qui se dégage suivant la réaction.
2H 2 O 2
2H 2 O + O 2
Selon (Dellarras et Bernard .,2003), le mode opératoire est le suivant :
 Sur une lame porte – objet, déposer une goute de H 2 O 2 à10 V.
 Ajouter une anse de bactéries prélevée d’une culture.
 Le dégagement des bulles de gaz signifie que le test est positif.
c) Les galeries Api
La Galerie API est formé de 20 microtubes, prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests
biochimiques (Joy et Reynaud., 2003 )