Chapitre II
Matériel et Méthodes
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Les germes supplémentaires recherchés sont les staphylocoques, les sulfitoréducteurs et les
salmonelles.
2.4.1.1 Les méthodes de dénombrement
Dans la présente étude, nous avons utilisé deux méthodes de dénombrement :
La méthode de fermentation en tubes multiples appelée aussi méthode du nombre le plus
probable (NPP) pour les coliformes totaux, fécaux et les streptocoques.
La méthode de filtration sur membrane pour les staphylocoques.
 méthode du nombre le plus probable (NPP)
La méthode de détermination du nombre le plus probable (NPP) est une estimation statistique
du nombre de germes dans un milieu liquide (Joy et Raynaud., 2003).
La détermination du nombre caractéristique (le nombre de tubes positifs) permettra
l’établissement du nombre le plus probable à l’aide de la table de Mc Grady (annexe III)
(Brisou et Denis .,1980 in Rodier et al .,2005)
 La méthode de filtration
La technique de filtration est une estimation plus exacte sur la charge bactérienne, elle consiste à
faire passer des produits liquides sur une paroi poreuse ou sur une membrane qui retient les
bactéries (Dellarras., 2007).
2.4.1.2 Dénombrement des coliformes
Le dénombrement des coliformes a été effectué par la méthode de NPP (Rodier et al, 2005).
Il fait appel à deux tests consécutifs à savoir :
 Test présomptif : réservé la recherche des coliformes totaux. fait sur un milieu
sélectif (bouillon lactosé), sa fermentation se traduit par un dégagement de gaz dans la
cloche de Durham et un trouble après une incubation à 37°c (figure 8).
 Test confirmatif : réservé pour la recherche des coliformes fécaux et Escherichia
coli sur un milieu plus sélectif (VBL) à une température de 44°c, à partir des tubes
positifs du test présomptif (figure 9).