Chapitre 2
Matériels & Méthodes
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B- Mode opératoire :
 1
er Enrichissement
Un premier enrichissement des Salmonelles est effectué sur bouillon au sélénite
de Sodium+Cystéine (SFB). Le SFB favorise leur développement en inhibant par l'action
du sélénite de Sodium, la croissance des coliformes et des entérocoques. Après filtation de
500ml de l’échantillon à analyser, mettre la membrane filtrante dans 100ml du milieu SFB,
ajouter 4 disques SFB et incuber à 37 °C pendant 18 à 48 heures.
 1
er Isolement
Du premier enrichissement, un isolement est réalisé sur gélose SS qui est un milieu
d'isolement des Salmonelles et des Shigelles, bien que de nombreuses bactéries à Gram
négatif puissent s'y développer. L'identification d'entérobactéries pathogènes repose
sur la non-utilisation des glucides présents dans la gélose. L'incubation est effectuée à 37°C
pendant.
 2
ème Enrichissement et 2
ème Isolement
À partir du premier enrichissement on procède à un deuxième enrichissement sur SFB
en tube (9ml) (S/C) auquel on ajoute 1 Disque SFB puis à un deuxième isolement qui
s'effectue par l’étalement d’une goutte du tube SFB positif sur la gélose SS. L’incubation se
fait toujours à 37°C pendant 18 à 24 heures.
 Lecture
Ce sont les colonies isolées suspectes, de couleur noire, rose ou rose à centre noir, qui
font l’objet de tests biochimique (coloration de Gram, test de la catalase, test de l’oxydase)
puis d’une identification à l’aide de la galerie API 20 E.
Les figures ci-après schématisent les techniques utilisées pour la recherche et
l’identification des salmonelles dans l’eau de mer.