Chapitre 2
Matériels & Méthodes
76
2.5.2.7.8. Recherche qualitative des vibrions et salmonelles
La recherche des Salmonelles et des Vibrions est effectuée par la méthode qualitative,
réalisée en trois étapes successives: enrichissement, isolement et identification biochimique
(RODIER et al, 1996).
2.5.2.7.8.1. Les vibrions
La plupart des vibrions sont d'origine marine et ne se multiplient qu'en présence de Na + .
Le genre comporte un certain nombre d'espèces qui sont pathogènes pour l'homme, leur
présence est indicatrice de pollution.
Les vibrions ont été isolés dans l’eau de mer, les sédiments marins, les poissons et les
fruits de mer dans plusieurs régions du monde. Certaines souches produisent une hémolysine
qu’on croyait être à l’origine d’intoxication alimentaire mais cette dernière est due à la
production d’entérotoxine. Les espèces pathogènes sont surtout mésophiles, ce qui revient à
dire qu'elles se présentent généralement (ubiquistes) dans les eaux tropicales, ainsi que dans
les eaux tempérées, où elles sont surtout abondantes à la fin de l'été ou au début de l'automne
(OMS/FAO, 1974).
A- Principe :
Un enrichissement des vibrions sur milieu Eau Peptonée Alcaline (EPA) 10 fois
concentrée précède leur isolement sur gélose TCBS (Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose).
Les colonies présumées vibrions sont identifiées grâce à la coloration de Gram, au test de la
catalase, au test de l’oxydase et aux tests biochimiques à l’aide de la galerie API20E.
B- Mode opératoire :
1
er enrichissement
Dans un flacon de 500ml, mettre 50 ml du milieu d'enrichissement EPA (concentré
10 fois), compléter avec 450ml d'eau de mer à analyser et incuber à 37 °C pendant
18 à 48 heures.
1
er isolement
À partir du premier enrichissement, procéder à un isolement en stries très serrées d'une
goutte prélevée en surface d'EPA positif (trouble), sur gélose TCBS. L'incubation doit se faire
à 37°C pendant 18 à 48 heures.
Lecture sur TCBS
2
ème enrichissement et 2
ème isolement
À partir du premier enrichissement on procède à un deuxième enrichissement sur EPA
en tube (9ml) (S/C) et à un deuxième isolement sur la gélose TCBS.
Lecture
Les colonies sont jaunes quand le milieu change de couleur (réduction du saccharose)
et sont vertes quand il garde sa coloration initiale (vert).
Matériels & Méthodes
76
2.5.2.7.8. Recherche qualitative des vibrions et salmonelles
La recherche des Salmonelles et des Vibrions est effectuée par la méthode qualitative,
réalisée en trois étapes successives: enrichissement, isolement et identification biochimique
(RODIER et al, 1996).
2.5.2.7.8.1. Les vibrions
La plupart des vibrions sont d'origine marine et ne se multiplient qu'en présence de Na + .
Le genre comporte un certain nombre d'espèces qui sont pathogènes pour l'homme, leur
présence est indicatrice de pollution.
Les vibrions ont été isolés dans l’eau de mer, les sédiments marins, les poissons et les
fruits de mer dans plusieurs régions du monde. Certaines souches produisent une hémolysine
qu’on croyait être à l’origine d’intoxication alimentaire mais cette dernière est due à la
production d’entérotoxine. Les espèces pathogènes sont surtout mésophiles, ce qui revient à
dire qu'elles se présentent généralement (ubiquistes) dans les eaux tropicales, ainsi que dans
les eaux tempérées, où elles sont surtout abondantes à la fin de l'été ou au début de l'automne
(OMS/FAO, 1974).
A- Principe :
Un enrichissement des vibrions sur milieu Eau Peptonée Alcaline (EPA) 10 fois
concentrée précède leur isolement sur gélose TCBS (Thiosulfate-Citrate-Bile-Saccharose).
Les colonies présumées vibrions sont identifiées grâce à la coloration de Gram, au test de la
catalase, au test de l’oxydase et aux tests biochimiques à l’aide de la galerie API20E.
B- Mode opératoire :
1
er enrichissement
Dans un flacon de 500ml, mettre 50 ml du milieu d'enrichissement EPA (concentré
10 fois), compléter avec 450ml d'eau de mer à analyser et incuber à 37 °C pendant
18 à 48 heures.
1
er isolement
À partir du premier enrichissement, procéder à un isolement en stries très serrées d'une
goutte prélevée en surface d'EPA positif (trouble), sur gélose TCBS. L'incubation doit se faire
à 37°C pendant 18 à 48 heures.
Lecture sur TCBS
2
ème enrichissement et 2
ème isolement
À partir du premier enrichissement on procède à un deuxième enrichissement sur EPA
en tube (9ml) (S/C) et à un deuxième isolement sur la gélose TCBS.
Lecture
Les colonies sont jaunes quand le milieu change de couleur (réduction du saccharose)
et sont vertes quand il garde sa coloration initiale (vert).