Chapitre 3
Matériels et méthodes
36
I0 et I : sont respectivement les intensités lumineuses incidente et émergente du milieu
absorbant.
ε : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
l : la longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
A : absorbance de la solution.
D.O : densité optique de la solution.
2.2.2 Analyse automatique des sels nutritifs
A. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952).
B. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage
de l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al,
1967).
Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la
méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier et al. 1996).
C. Dosage de l’Azote ammoniacal
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé par Thé pour la détermination
de l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859)
modifiée par Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N. En milieu alcalin
(8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former une
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite (milieu
oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré
vert est formé. La réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé
formé dans un maximum d’absorption qui se fait à une longueur d’onde de 630 nm.
D. Dosage des ortho phosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bainmarie), les ions ortho phosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour
former un complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique
(Murphy et Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption
à 880 nm.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser.
Matériels et méthodes
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I0 et I : sont respectivement les intensités lumineuses incidente et émergente du milieu
absorbant.
ε : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
l : la longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
A : absorbance de la solution.
D.O : densité optique de la solution.
2.2.2 Analyse automatique des sels nutritifs
A. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952).
B. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage
de l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al,
1967).
Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la
méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (Rodier et al. 1996).
C. Dosage de l’Azote ammoniacal
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé par Thé pour la détermination
de l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de Berthelot (1859)
modifiée par Thé. Elle s'applique à des concentrations allant de 2 à 100 ppb N. En milieu alcalin
(8 < pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former une
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite (milieu
oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré
vert est formé. La réaction de Thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé
formé dans un maximum d’absorption qui se fait à une longueur d’onde de 630 nm.
D. Dosage des ortho phosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bainmarie), les ions ortho phosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour
former un complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique
(Murphy et Riley, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption
à 880 nm.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser.