Matériel et Méthodes
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III.3- Technique d’analyse des hydrocarbures
Différentes techniques ont été mises en œuvre pour l’analyse des polluants organiques
marins. Les méthodes spectrales avec la chromatographie en phase gazeuse offrent des
résultats particulièrement satisfaisants du point de vue quantitatif et qualitatif.
III.3.1. Spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V)
La Spectrofluorimétrie ultraviolet UV, est une technique de mesure quantitative des
hydrocarbures aromatiques préconisée par la Commission Océanographique
Intergouvernementale de l’UNESCO (1984) pour la surveillance de la pollution marine par
les hydrocarbures. Elle permet d'apprécier globalement la teneur en hydrocarbures
aromatiques, elle est très sensible et peu sujette aux interférences.
Les teneurs mesurées ne représentent pas réellement les concentrations absolues
d’hydrocarbures. Cependant, la réponse de fluorescence fournit un excellent indice de
pollution pétrolière du fait de la très faible teneur des hydrocarbures aromatiques biogènes
dans le milieu marin. La limite de détection est de l’ordre de 0,1μg/l pour l’eau de mer
(CNEXO, 1983).
III.3.1.1.Principe
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases :
L’excitation
L’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette est un
phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers une
orbitale antiliante.
La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un état excité. L’ensemble
des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La radiation ultraviolette de
même que la lumière visible possède suffisamment d’énergie pour transférer des électrons
vers des orbitales antiliantes créant ainsi un état électronique excité.
L’émission
Le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est relativement
stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune l’émission d’une
radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le spectre
d’émission du rayonnement de fluorescence.
L’intensité de la fluorescence est proportionnelle à la concentration de l’échantillon à
condition que cette dernière soit comprise dans la gamme étalon. Cette technique s‘applique
en particulier aux molécules possédant des liaisons doubles conjuguées tels que les
hydrocarbures aromatiques et poly aromatiques.
III.3.1.2. Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorimètre HITACHI
modèle 650-10 high sensitivity (Figure 3.13), équipé d’une lampe à xénon avec des fentes
de 1.5 nm à 20 nm et un balayage allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules
en quartz de 1 centimètre de trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume de 0,5ml
d’échantillon est suffisant à l’analyse.
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III.3- Technique d’analyse des hydrocarbures
Différentes techniques ont été mises en œuvre pour l’analyse des polluants organiques
marins. Les méthodes spectrales avec la chromatographie en phase gazeuse offrent des
résultats particulièrement satisfaisants du point de vue quantitatif et qualitatif.
III.3.1. Spectrofluorimétrie à rayonnement ultraviolet (S.F.U.V)
La Spectrofluorimétrie ultraviolet UV, est une technique de mesure quantitative des
hydrocarbures aromatiques préconisée par la Commission Océanographique
Intergouvernementale de l’UNESCO (1984) pour la surveillance de la pollution marine par
les hydrocarbures. Elle permet d'apprécier globalement la teneur en hydrocarbures
aromatiques, elle est très sensible et peu sujette aux interférences.
Les teneurs mesurées ne représentent pas réellement les concentrations absolues
d’hydrocarbures. Cependant, la réponse de fluorescence fournit un excellent indice de
pollution pétrolière du fait de la très faible teneur des hydrocarbures aromatiques biogènes
dans le milieu marin. La limite de détection est de l’ordre de 0,1μg/l pour l’eau de mer
(CNEXO, 1983).
III.3.1.1.Principe
La fluorescence est un phénomène qui se produit en deux phases :
L’excitation
L’excitation d’une molécule par une radiation électromagnétique ultraviolette est un
phénomène rapide qui se traduit par le transfert d’un électron d’une orbitale liante vers une
orbitale antiliante.
La molécule passe ainsi de son état électronique fondamental vers un état excité. L’ensemble
des transitions électroniques constitue le spectre d’excitation. La radiation ultraviolette de
même que la lumière visible possède suffisamment d’énergie pour transférer des électrons
vers des orbitales antiliantes créant ainsi un état électronique excité.
L’émission
Le retour à un état électronique de moindre énergie ou désactivation est relativement
stable. Il fait intervenir un grand nombre de transitions produisant chacune l’émission d’une
radiation dans toutes les directions. L’ensemble des transitions constitue le spectre
d’émission du rayonnement de fluorescence.
L’intensité de la fluorescence est proportionnelle à la concentration de l’échantillon à
condition que cette dernière soit comprise dans la gamme étalon. Cette technique s‘applique
en particulier aux molécules possédant des liaisons doubles conjuguées tels que les
hydrocarbures aromatiques et poly aromatiques.
III.3.1.2. Appareillage analytique
Les hydrocarbures polyaromatiques sont analysés avec un spectrofluorimètre HITACHI
modèle 650-10 high sensitivity (Figure 3.13), équipé d’une lampe à xénon avec des fentes
de 1.5 nm à 20 nm et un balayage allant de 220 à 830 nm. L’appareil contient des cellules
en quartz de 1 centimètre de trajet optique, polies sur les quatre faces. Un volume de 0,5ml
d’échantillon est suffisant à l’analyse.