Chapitre II : Méthode d’identification
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Figure 13 : principe de technique PCR-RFLP
(http://gen-net-pop.univ-lyon1.fr/cours/chap2/animation22.htm)
2.2.7 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)
Mise au point par Williams et al. (1990), Cette technique permet l'analyse de l'ADN
nucléaire (simple copie ou répétitif) en utilisant les propriétés de l'amplification PCR et de
redondance de l'information contenue dans le code génétique (Williams, et al.,1990).Elle
consiste a réaliser une amplification PCR avec des amorces d'environ 10 pb définies de façon
aléatoire. Si les 2 sites d'hybridation sont suffisamment proches, l'amplification par PCR est
possible. Une variabilité dans la séquence des sites entre individus sera détectée par un
polymorphisme du nombre et de la longueur des fragments d'ADN amplifiés (Hubert, 2007).
Cette technique a l'avantage d'être rapide avec peu de mise au point et révèle un
polymorphisme important mais ce marqueur est dominant et les conditions de PCR sont très
sensibles (Hubert, 2007).
Une variante de la technique RAPD est d'utiliser des microsatellites comme amorces
ce qui permet d'amplifier des régions comprises entre deux microsatellites (ISSR = Internal
simple sequencerepeat). Les primers sont choisis en fonction des profils satisfaisants obtenus
entre différentes espèces (bactéries, végétaux, animaux). Les primers qui ne produisent pas de
changements de profils RAPD ne sont pas retenus dans l’interprétation des résultats, qui sont
exprimes en genomictemplatestability (GST).
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Figure 13 : principe de technique PCR-RFLP
(http://gen-net-pop.univ-lyon1.fr/cours/chap2/animation22.htm)
2.2.7 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)
Mise au point par Williams et al. (1990), Cette technique permet l'analyse de l'ADN
nucléaire (simple copie ou répétitif) en utilisant les propriétés de l'amplification PCR et de
redondance de l'information contenue dans le code génétique (Williams, et al.,1990).Elle
consiste a réaliser une amplification PCR avec des amorces d'environ 10 pb définies de façon
aléatoire. Si les 2 sites d'hybridation sont suffisamment proches, l'amplification par PCR est
possible. Une variabilité dans la séquence des sites entre individus sera détectée par un
polymorphisme du nombre et de la longueur des fragments d'ADN amplifiés (Hubert, 2007).
Cette technique a l'avantage d'être rapide avec peu de mise au point et révèle un
polymorphisme important mais ce marqueur est dominant et les conditions de PCR sont très
sensibles (Hubert, 2007).
Une variante de la technique RAPD est d'utiliser des microsatellites comme amorces
ce qui permet d'amplifier des régions comprises entre deux microsatellites (ISSR = Internal
simple sequencerepeat). Les primers sont choisis en fonction des profils satisfaisants obtenus
entre différentes espèces (bactéries, végétaux, animaux). Les primers qui ne produisent pas de
changements de profils RAPD ne sont pas retenus dans l’interprétation des résultats, qui sont
exprimes en genomictemplatestability (GST).