Chapitre II : Méthode d’identification
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 Désoxyribonucléoside triphosphates
Des désoxyribonucléoside triphosphates libres (dNTP) sont nécessaires pour
lasynthèse de l’ADN(Somma,et al., 2006).
Les concentrations de dNTP pour la PCR devraient être de 20 à 200 μM pour chaque
dNTP et les quatre dNTP devraient être utilisés à des concentrations équivalentes pour réduire
au minimum les erreurs de mésincorporation(Innis, et al., 1988).
 Tampons de réaction et MgCl2 dans les réactions PCR
Outre les réactifs qui interviennent directement dans la réaction, la PCR requiert un
tampon approprié. La composition du tampon dépend du type et des caractéristiques de
l’enzyme utilisée (Somma, et al., 2006).
Le tampon de réaction le plus couramment utilisé avec l’ADN polymérase Taq contient:
• 10 mM de Tris, pH 8,3
• 50 mM de KCl
• 1,5-2,5 mM de MgCl2
La présence de cations bivalents dans la PCR est essentielle. La concentration de MgCl2 dans
le mélange de réaction final est généralement de 0,5 à 5,0 mM, et la concentration optimale
est déterminée empiriquement (Somma, et al., 2006).
Les ions Mg2+:
Forment un complexe soluble avec les dNTP, ce qui est essentiel pour l’incorporation des
dNTP,
Stimulent l’activité polymérase.
Augmentent la Tf de l’interaction amorce/matrice (et stabilisent par conséquent
l’interaction entre les deux chaînes).
En général, une faible concentration de Mg2+ conduit à un faible rendement (ou à
uneproduction nulle), alors qu’une concentration de Mg2+ élevée entraîne uneaccumulation
de produits non spécifiques «mésamorçage» (Somma, et al., 2006).