Chapitre II : Méthode d’identification
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Figure 9 : L’amplification exponentielle de l’ADN dans la PCR.
(Somma, et al., 2006).
 ADN cible :
En principe, la PCR peut être effectuée si au moins une copie intacte du gène cible est
présente. Un plus grand nombre de copies cibles améliore la probabilité de succès
l’amplification de l’ADN. Tout dommage, tel qu’une entaille dans l’ADN cible, bloquera la
PCR. La taille de la séquence cible peut se situer entre moins de 0,1 et quelques kb. La
quantité totale d’ADN généralement utilisée pour la PCR est de 0,05 à 1,0 μg, ce qui permet
la détection de copies uniques de la séquence cible. Même si un échantillon ne doit pas être
hautement purifié, certains contaminants, tels que l’héparine, des hèmes, le formol, des
chélateurs Mg2+, ainsi que des détergents, doivent être éliminés pour éviter l’inhibition du
processus d’amplification (Somma, et al., 2006).
 Amorces
D’une façon générale, les amorces utilisées ont une longueur de 16–30 nucléotides, ce
qui autorise une température d’hybridation raisonnablement élevée. Les amorces doivent être
exemptes de suites de séquences de polybases (poly-dG, par exemple)ou de motifs répétitifs,
ceux-ci pouvant s’hybrider de manière inadéquate avec la matrice.