Chapitre II : Méthode d’identification
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2.2.2 PCR (Polymerase Chain Reaction) :
La PCR est une puissante technique analytique et préparatoire qui est largement
utilisée en biologie moléculaire(Somma, et al., 2006).
La mise au point de la technique de réaction de polymérisation en chaîne (PCR) par K.
Mullis et ses collaborateurs en 1985 a révolutionné la biologie moléculaire, La réaction de
polymérisation en chaîne est une technique in vitro utilisée pour amplifier à l’aide d’enzymes
une région déterminée de l’ADN qui se trouve entre deux régions de séquence ADN
connue(Somma, et al., 2006).
Le principe de l’amplification in vitro repose su la répétition de trois processus :
i. La dénaturation des deux brins d’ADN à température élevée (environ95°C) afin
d’obtenir des molécules d’ADN monocaténaire. (Tagu, 1999).
ii. L’hybridation d’oligonucléotides (amorces) complémentaires d’une séquence de
l’ADN monocaténaire cible (la température est alors ramenée à une valeur comprise
entre 40°C et 65°C (afin de permettre une bonne fixation des amorces) (Tagu, 1999).
La température d’hybradation est inférieur d’environ 5°C de la Tm
Tm= 2 (A+T) + 4 (C+G)
iii. La réaction d’élongation par une ADN polymérase thermostable (la Taq polymérase) à
partir des oligonucléotides , réalisée à la température optimale de 72°C (Tagu, 1999).
Les produits de ce premier cycle sont ensuite dénaturés par la chaleur. Les amorces sont à
nouveau hybridées avec les brins d’ADN provenant du premier cycle d’amplification, chaque
brin servant de matrice à la polymérase .A chaque cycle le nombre de copie du fragment
d’ADN est doublé : 2
n molécules sont ainsi obtenues après n cycles(Tagu, 1999).
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2.2.2 PCR (Polymerase Chain Reaction) :
La PCR est une puissante technique analytique et préparatoire qui est largement
utilisée en biologie moléculaire(Somma, et al., 2006).
La mise au point de la technique de réaction de polymérisation en chaîne (PCR) par K.
Mullis et ses collaborateurs en 1985 a révolutionné la biologie moléculaire, La réaction de
polymérisation en chaîne est une technique in vitro utilisée pour amplifier à l’aide d’enzymes
une région déterminée de l’ADN qui se trouve entre deux régions de séquence ADN
connue(Somma, et al., 2006).
Le principe de l’amplification in vitro repose su la répétition de trois processus :
i. La dénaturation des deux brins d’ADN à température élevée (environ95°C) afin
d’obtenir des molécules d’ADN monocaténaire. (Tagu, 1999).
ii. L’hybridation d’oligonucléotides (amorces) complémentaires d’une séquence de
l’ADN monocaténaire cible (la température est alors ramenée à une valeur comprise
entre 40°C et 65°C (afin de permettre une bonne fixation des amorces) (Tagu, 1999).
La température d’hybradation est inférieur d’environ 5°C de la Tm
Tm= 2 (A+T) + 4 (C+G)
iii. La réaction d’élongation par une ADN polymérase thermostable (la Taq polymérase) à
partir des oligonucléotides , réalisée à la température optimale de 72°C (Tagu, 1999).
Les produits de ce premier cycle sont ensuite dénaturés par la chaleur. Les amorces sont à
nouveau hybridées avec les brins d’ADN provenant du premier cycle d’amplification, chaque
brin servant de matrice à la polymérase .A chaque cycle le nombre de copie du fragment
d’ADN est doublé : 2
n molécules sont ainsi obtenues après n cycles(Tagu, 1999).