Chapitre II : Méthode d’identification
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Les marqueurs enzymatiques sont plus souvent désignés par le terme allozymes
quisont les variations alléliques d’une enzyme. En effet, chaque individu diploïde possède
deux séquences d’ADN (une sur chaque chromosome homologue) correspondant à la même
enzyme, qui à la traduction, peuvent donner deux formes enzymatiques différentes ou
allozymes si les séquences sont différentes. Ces différences en séquences d’acides aminés
composant l’enzyme peuvent être mises en évidence par une électrophorèse (Chlaida , 2009).
Cependant, certains auteurs ont montré l’effet de l’environnement sur l’expression
enzymatique (Lemaire, et al., 2000).
2.1.2 Principe de l’électrophorèse
Le principe de l'électrophorèse repose sur la séparation des mélanges de substances par
l'action d'un champ électrique. En fonction de la somme des charges en présence, de la taille
et de la structure des différentes particules de substance, il y a migration en direction de
l'électrode opposée (Protz , 1983) (figure 5)
Divers molécules biologiques importantes : acides aminés, peptides, protéines et acide
nucléiques, possèdent des groupes ionisables qui a un pH donné, se transforment en espèces
chargées électriquement sous forme tantot de cation(+),tantot d’anions (-), en fonction de la
nature de la charge du réseau ,les particules chargé migreront soit vers la cathode, soit vers
l’anode . A titre d’exemple, lorsqu’un champ électrique traverse un gel de pH neutre, les
groupes de phosphates chargés négativement de l’ADN provoquent la migration de celui-ci
vers l’anode(Protz , 1983).
La séparation de macromolécules dépend de deux variables : la charge et la masse.
Lorsqu’un échantillon biologique tel qu’un ADN est mélangé à une solution tampon et
appliqué sur un gel, il se produit une interaction des deux variables. Les molécules
repoussées d’un côté par le courant électrique produit par une électrode sont attirées
simultanément par le courant produit par l’autre électrode (Somma, et al., 2006).
La force de friction du matériau composant le gel joue le rôle de « tamis moléculaire »
et sépare les molécules en fonction de leur taille.
Durant l’électrophorèse, les macromolécules sont poussées à travers les pores. Leur
vitesse de migration à travers le champ électrique dépend des facteurs suivants :
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Les marqueurs enzymatiques sont plus souvent désignés par le terme allozymes
quisont les variations alléliques d’une enzyme. En effet, chaque individu diploïde possède
deux séquences d’ADN (une sur chaque chromosome homologue) correspondant à la même
enzyme, qui à la traduction, peuvent donner deux formes enzymatiques différentes ou
allozymes si les séquences sont différentes. Ces différences en séquences d’acides aminés
composant l’enzyme peuvent être mises en évidence par une électrophorèse (Chlaida , 2009).
Cependant, certains auteurs ont montré l’effet de l’environnement sur l’expression
enzymatique (Lemaire, et al., 2000).
2.1.2 Principe de l’électrophorèse
Le principe de l'électrophorèse repose sur la séparation des mélanges de substances par
l'action d'un champ électrique. En fonction de la somme des charges en présence, de la taille
et de la structure des différentes particules de substance, il y a migration en direction de
l'électrode opposée (Protz , 1983) (figure 5)
Divers molécules biologiques importantes : acides aminés, peptides, protéines et acide
nucléiques, possèdent des groupes ionisables qui a un pH donné, se transforment en espèces
chargées électriquement sous forme tantot de cation(+),tantot d’anions (-), en fonction de la
nature de la charge du réseau ,les particules chargé migreront soit vers la cathode, soit vers
l’anode . A titre d’exemple, lorsqu’un champ électrique traverse un gel de pH neutre, les
groupes de phosphates chargés négativement de l’ADN provoquent la migration de celui-ci
vers l’anode(Protz , 1983).
La séparation de macromolécules dépend de deux variables : la charge et la masse.
Lorsqu’un échantillon biologique tel qu’un ADN est mélangé à une solution tampon et
appliqué sur un gel, il se produit une interaction des deux variables. Les molécules
repoussées d’un côté par le courant électrique produit par une électrode sont attirées
simultanément par le courant produit par l’autre électrode (Somma, et al., 2006).
La force de friction du matériau composant le gel joue le rôle de « tamis moléculaire »
et sépare les molécules en fonction de leur taille.
Durant l’électrophorèse, les macromolécules sont poussées à travers les pores. Leur
vitesse de migration à travers le champ électrique dépend des facteurs suivants :