Chapitre II : Matériels et méthodes
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D. Filtrations sur membrane et incubation :
 Avaat de ppooodee à l’essai, l’’’haatilloo à aaallsee doit tte haufff daas uu aii aaie à
75° C ± 5°C pendant 15 mn à partir du moment où cette température a été atteinte.
 Filtration de 100ml ou de 20 ml sur une membrane de 0.22 µm.
 Après filtration, enlever la membrane avec une pince stérile et la placer, face supérieure
touuuue vees le as daas le foot d’uue oite de pétri
 EEsuite veesee soiggeuseeeet le ilieu de ultuue liiuufii avee additifs, jussu’au eeood de la
boite de pétri.
 Incuber à 37 ± 1° C pendant 20 ± 4 h (1 ère lecture) et 44 ± 4 h (2eme lecture).
E. Dénombrement et expression des résultats :
Une première lecture (dénombrement des colonies) après 20 ± 4h et effectuée .
L’’’uuuuatioo appps
h doit tte iidiiuue ; dans le cas où il y a une diffusion des halos
conduisant à une coloration noire, seule la 1ere lecture est prise en considération et sera indiquée
seulement comme valeur approximative.
En effet, en présence de nombreuses colonies, une diffusion des halos peut conduire à une
coloration noire uniforme de la membrane, rendant le dénombrement impossible en 48h (Norme NF
EN 26461-2 ISO 6461-2).
L’eeppessioo des sultats se fait oooe suit :
Avec :
N : nombre de bactéries en UFC/ 100 ml ;
C : nombre de colonies caractéristiques ;
V : voluue d’’’haatilloo filttt ;
d : facteur de dilution effectué.
La Technique de dénombrement des bactéries sulfitoréductrices est représentée dans la figure 15.