Chapitre 3
Matériel et Méthodes
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3.6.3. Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus
Les membranes, issues de filtration, sont déposées sur gélose Chapman, caractérisée par une
concentration élevée en NaCl, et incubées à 36 ± 2°C pendant 44 ± 4h (Figure 3.5). Les
colonies, présentant l’aspect de Staphylococcus aureus, à contours réguliers et pigmentées soit
en jaune (fermentation du mannitol) ou en blanc sont soumises aux tests biochimiques de
coagulase et de catalase (Rodier, 2009).
Test de catalase
- Placer une goutte d’une solution de peroxyde d’hydrogène (H2O2) sur une lame de microscope (1/20 volumes de la lame) ;
- Prélever une demi-colonne avec une pipette pasteur stérile et l’émulsionner doucement
dans la goutte d’H2O2 ;
- Observer immédiatement, s’il y a apparition de bulles d’oxygène ; le test est positif (catalase positive) sinon il est négatif donc catalase négative.
Test de coagulase
- Un bouillon BHIB est ensemencé avec une moitié d’une colonie caractéristique puis incubé à 36 ± 2 °C pendant 20 ± 4h.
- Après incubation du bouillon BHIB, ajouter stérilement 0.1 ml de cette culture à 0.3 ml
de plasma de lapin contenu dans un tube à essai ou à hémolyse, et incuber de nouveau à
36 ± 2 °C pendant 2 à 6 heures ;
- Considérer que la réaction à la coagulase est positive quand le coagulum occupe plus des
trois quarts du volume initialement occupé par le liquide.
Expression des résultats
𝑁 =
𝐶
𝑉 ∗ 𝑑
Avec :
N : nombre de bactéries en UFC/ 100 ml ;
C : nombre de colonies caractéristiques ;
V : volume d’échantillon filtré ;
d : le facteur de dilution effectué.