CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES
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II.5.2. Extraction et quantification de l’amidon (COSTA et al., 2016 ; SMITH et ZEEMAN,
2006)
La méthode utilisée consiste à hydrolyser, à l’aide d’une suspension enzymatique de αamyloglucosidase (AGS) et de α-amylase, l’amidon en glucose qui est ensuite quantifié selon la
méthode décrite dans la section 5.1. Les résidus insolubles de centrifugation issus de l'extraction
des sucres solubles furent homogénéisés dans un 1 ml d’eau ultrapure puis centrifugés à 12 000
tr/min pendant 2 minutes. Cette opération a été répétée 4 fois afin de laver les résidus et éliminer
les extraits éthanoliques qui auraient pu fausser le dosage de l’amidon. Une fois lavés, les culots
ont été resuspendus dans un 1 ml d’eau ultrapure dans des tubes Eppendorf percés et incubés à
100°C pendant 5 minutes. Cent µl en ont été prélevés après homogénéisation, auxquels furent
ajoutés 500 µl de la suspension enzymatique (1.4 U
1
AGS et 2U α-amylase par échantillons). Les
solutions ont été laissées à incuber une nuit à 37°C, puis centrifugées et diluées 4 fois (250 µl du
surnageant dans 1 000 µl). La quantité de glucose, i.e. d'amidon hydrolysé a été déterminé comme
décrit dans la section 5.1.
II.6. Traitement statistique des données
L’ensemble des données obtenues ont été traitées à l’aide du logiciel R Studio. Afin d’explorer les
relations entre les différents paramètres mesurés à 10 m, une matrice des corrélations de Pearson
entre les différentes variables a été construite. La force des corrélations entre les variables a été
définie d’après FLOWER et COHEN (1990) : à un coefficient de corrélation de Pearson (r)
compris entre 0.00 et 0.19 correspond un très faible niveau de corrélation ; entre 0.20 et 0.39 une
faible corrélation ; de 0.4 à 0.69 une corrélation modeste ; entre 0.7 et 0.89 une forte corrélation ;
et enfin entre 0.90 et 1.00 une très forte corrélation. La significativité des différences entre les
concentrations en sucres solubles et en amidon dans les feuilles et les rhizomes le long du profil
bathymétrique ont été mises en évidence au travers d’une analyse non paramétrique de la variance
(test de Kruskal-Wallis), suivi d’un test de comparaison multiple des moyennes de Dunn (p<0.05).
1
L'unité d'activité enzymatique (U) est définie en termes de quantité de substrat disparaissant par unité de temps ou
de quantité de produit apparaissant par unité de temps
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II.5.2. Extraction et quantification de l’amidon (COSTA et al., 2016 ; SMITH et ZEEMAN,
2006)
La méthode utilisée consiste à hydrolyser, à l’aide d’une suspension enzymatique de αamyloglucosidase (AGS) et de α-amylase, l’amidon en glucose qui est ensuite quantifié selon la
méthode décrite dans la section 5.1. Les résidus insolubles de centrifugation issus de l'extraction
des sucres solubles furent homogénéisés dans un 1 ml d’eau ultrapure puis centrifugés à 12 000
tr/min pendant 2 minutes. Cette opération a été répétée 4 fois afin de laver les résidus et éliminer
les extraits éthanoliques qui auraient pu fausser le dosage de l’amidon. Une fois lavés, les culots
ont été resuspendus dans un 1 ml d’eau ultrapure dans des tubes Eppendorf percés et incubés à
100°C pendant 5 minutes. Cent µl en ont été prélevés après homogénéisation, auxquels furent
ajoutés 500 µl de la suspension enzymatique (1.4 U
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AGS et 2U α-amylase par échantillons). Les
solutions ont été laissées à incuber une nuit à 37°C, puis centrifugées et diluées 4 fois (250 µl du
surnageant dans 1 000 µl). La quantité de glucose, i.e. d'amidon hydrolysé a été déterminé comme
décrit dans la section 5.1.
II.6. Traitement statistique des données
L’ensemble des données obtenues ont été traitées à l’aide du logiciel R Studio. Afin d’explorer les
relations entre les différents paramètres mesurés à 10 m, une matrice des corrélations de Pearson
entre les différentes variables a été construite. La force des corrélations entre les variables a été
définie d’après FLOWER et COHEN (1990) : à un coefficient de corrélation de Pearson (r)
compris entre 0.00 et 0.19 correspond un très faible niveau de corrélation ; entre 0.20 et 0.39 une
faible corrélation ; de 0.4 à 0.69 une corrélation modeste ; entre 0.7 et 0.89 une forte corrélation ;
et enfin entre 0.90 et 1.00 une très forte corrélation. La significativité des différences entre les
concentrations en sucres solubles et en amidon dans les feuilles et les rhizomes le long du profil
bathymétrique ont été mises en évidence au travers d’une analyse non paramétrique de la variance
(test de Kruskal-Wallis), suivi d’un test de comparaison multiple des moyennes de Dunn (p<0.05).
1
L'unité d'activité enzymatique (U) est définie en termes de quantité de substrat disparaissant par unité de temps ou
de quantité de produit apparaissant par unité de temps