| Matériels et Méthodes
33
c.
Mode opératoire
1- Analyse au laboratoire
L’analyse de la chlorophylle nécessite une protection permanente contre la lumière à
toutes les étapes du protocole analytique, car ces pigments sont photosensibles.
2- Filtration et conservation
Dès le retour au laboratoire on filtre l’eau le plus rapidement possible et on ajoute
quelques gouttes de MgCO3 sur le filtre.
Le filtre est plié en quatre et enrobé dans un papier aluminium préalablement
étiqueté.
Mettre les filtres dans le congélateur pour une analyse ultérieure.
3- Extraction des pigments
- L’extraction se fait par l’addition de 10 ml d’acétone à 90% (90/10 acétone/eau).
- On mesure l’absorbance dans une cuve de 1 cm de trajet optique à l’aide d’un
spectrophotomètre de marque CECIL type CE 1021 Séries 10000,à une longueur
d’onde de 665 nm et cela dans un premier temps sans acidification, puis en deuxième
lieu avec acidification (acide chlorhydrique à 0,3mol/l soit 25 ml d’HCL pour 1000 ml
d’eau distillée) pour obtenir la mesure des phéopigments.
- Deux autres mesures d’absorbance ont été réalisées, l’une est celle du blanc de cuve qui
a été obtenue par la mesure de l’absorbance de la paroi de la cuve avec de l’eau distillée
et la seconde mesure est celle est celle du blanc de filtre (acétone à 90%) avec filtre
avant et après acidification.
Les calculs
[Chlorophylle « a »] (µg/l) = 27,7. (A665na-A665a).v/V.L
[Phéopigments« a »] (µg/l) =27,7. (1.5A665a-A665na).v/V.L
Avec:
V:volume d’eau filtré en (litre).
v : volume d’acétone en (millilitre).
L : longueur du chemin optique de la cuve de mesure, (1cm).
Aussi :
A665 na =Ab665na-Ab750na.
A665a=Ab665a-Ab750a.
Avec :
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c.
Mode opératoire
1- Analyse au laboratoire
L’analyse de la chlorophylle nécessite une protection permanente contre la lumière à
toutes les étapes du protocole analytique, car ces pigments sont photosensibles.
2- Filtration et conservation
Dès le retour au laboratoire on filtre l’eau le plus rapidement possible et on ajoute
quelques gouttes de MgCO3 sur le filtre.
Le filtre est plié en quatre et enrobé dans un papier aluminium préalablement
étiqueté.
Mettre les filtres dans le congélateur pour une analyse ultérieure.
3- Extraction des pigments
- L’extraction se fait par l’addition de 10 ml d’acétone à 90% (90/10 acétone/eau).
- On mesure l’absorbance dans une cuve de 1 cm de trajet optique à l’aide d’un
spectrophotomètre de marque CECIL type CE 1021 Séries 10000,à une longueur
d’onde de 665 nm et cela dans un premier temps sans acidification, puis en deuxième
lieu avec acidification (acide chlorhydrique à 0,3mol/l soit 25 ml d’HCL pour 1000 ml
d’eau distillée) pour obtenir la mesure des phéopigments.
- Deux autres mesures d’absorbance ont été réalisées, l’une est celle du blanc de cuve qui
a été obtenue par la mesure de l’absorbance de la paroi de la cuve avec de l’eau distillée
et la seconde mesure est celle est celle du blanc de filtre (acétone à 90%) avec filtre
avant et après acidification.
Les calculs
[Chlorophylle « a »] (µg/l) = 27,7. (A665na-A665a).v/V.L
[Phéopigments« a »] (µg/l) =27,7. (1.5A665a-A665na).v/V.L
Avec:
V:volume d’eau filtré en (litre).
v : volume d’acétone en (millilitre).
L : longueur du chemin optique de la cuve de mesure, (1cm).
Aussi :
A665 na =Ab665na-Ab750na.
A665a=Ab665a-Ab750a.
Avec :