Chapitre II : Matériel et méthodes
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touchés. Par contre, les troubles peuvent être morbides. Or, cette bactérie étant ubiquitaire,
on la retrouve en faible quantité mais dans un très grand nombre d'aliments (Demay, 2006).
4.2.7.2. Mode opératoire
Selon la norme AFNOR V 08-055, La recherche de Listeria monocytogenes nécessite
quatre étapes obligatoires qui sont le pré-enrichissement, l’enrichissement, l’isolement
et l’identification biochimique et sérologique (Demay, 2006).
Etape 1 : Pré-enrichissement
- Prélever, aseptiquement 25g de la chair bien broyée de chaque échantillon à analyser.
- Ajouter, aseptiquement, dans un flacon stérile, 225 ml du milieu liquide sélectif dit Fraser
Demi, à l’unité d’analyse préalablement pesée.
- Mélanger au mixeur stérile pendant 4 à 5 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange
homogène.
- Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à 36°C, pendant 24 heures.
Etape 2 : Enrichissement
- Transférer, à l’aide d’une pipette stérile, 0,1 ml de chaque milieu liquide pré-enrichi dans
10 ml de milieu liquide sélectif Fraser.
- Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à 36°C, pendant 24 heures.
Etape 3 : Isolement
- Ensemencer, une 1ml du milieu liquide d’enrichissement, par strie, sur le milieu
gélosé sélectif Oxford coulé dans des boites de Pétri stériles.
- Incuber, boîtes ainsi préparées, à 36°C, pendant 24 heures à cinq jours.
- Les colonies caractéristiques de Listeria monocytogenes sur le milieu gélosé sélectif
Oxford sont rondes, grandes, régulières et transparentes.
Etape 4 : lecture et identification biochimique
- Repiquer cinq colonies suspectes caractéristiques de Listeria, dans un tube contenant 5 ml
du milieu liquide Tryptone Soja Extrait de Levure (TSYE).
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touchés. Par contre, les troubles peuvent être morbides. Or, cette bactérie étant ubiquitaire,
on la retrouve en faible quantité mais dans un très grand nombre d'aliments (Demay, 2006).
4.2.7.2. Mode opératoire
Selon la norme AFNOR V 08-055, La recherche de Listeria monocytogenes nécessite
quatre étapes obligatoires qui sont le pré-enrichissement, l’enrichissement, l’isolement
et l’identification biochimique et sérologique (Demay, 2006).
Etape 1 : Pré-enrichissement
- Prélever, aseptiquement 25g de la chair bien broyée de chaque échantillon à analyser.
- Ajouter, aseptiquement, dans un flacon stérile, 225 ml du milieu liquide sélectif dit Fraser
Demi, à l’unité d’analyse préalablement pesée.
- Mélanger au mixeur stérile pendant 4 à 5 minutes, jusqu’à l’obtention d’un mélange
homogène.
- Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à 36°C, pendant 24 heures.
Etape 2 : Enrichissement
- Transférer, à l’aide d’une pipette stérile, 0,1 ml de chaque milieu liquide pré-enrichi dans
10 ml de milieu liquide sélectif Fraser.
- Incuber, l’ensemble ainsi préparé, à 36°C, pendant 24 heures.
Etape 3 : Isolement
- Ensemencer, une 1ml du milieu liquide d’enrichissement, par strie, sur le milieu
gélosé sélectif Oxford coulé dans des boites de Pétri stériles.
- Incuber, boîtes ainsi préparées, à 36°C, pendant 24 heures à cinq jours.
- Les colonies caractéristiques de Listeria monocytogenes sur le milieu gélosé sélectif
Oxford sont rondes, grandes, régulières et transparentes.
Etape 4 : lecture et identification biochimique
- Repiquer cinq colonies suspectes caractéristiques de Listeria, dans un tube contenant 5 ml
du milieu liquide Tryptone Soja Extrait de Levure (TSYE).