Chapitre II : Matériel et méthodes
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Escherichia coli
Cette bactérie correspond à des coliformes thermo-tolérants qui produisent de l’indole à
partir du tryptophane à 44°C, c’est l’indicateur est le plus spécifique d’une contamination
fécale (Marjorie, 1987).
4.2.3.1.2.
Mode opératoire
- Déposer 1 ml de chaque solution mère et de chaque dilution décimale, dans deux boîtes
de Pétri stériles.
- Ajouter, par incorporation, 15 ml du milieu gélosé sélectif Lactosé au Désoxycholate à
1‰ fondue et ramenée à 47°C.
- Mélanger l’inoculum au milieu par des mouvements de 8 et le laisser solidifier.
- Recouvrir l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche protectrice de 5 ml du milieu
gélosé sélectif Désoxycholate lactose.
- Laisser se solidifier la gélose.
- Incuber, une boîte, à 35°C, pour les Coliformes Totaux et une boîte, à 44°C, pour
les Coliformes Fécaux, durant 48 heures.
- après 48 heures, repiquer, des boites positives, les colonies rouges fluorescentes sous UV
dans de l’eau peptonnée exempte d’indole, puis incuber les tubes à 44°C pendant 24 heures.
- Ajouter quelques gouttes du réactif de Kovacs le 2
èm jour.
4.2.3.1.3.
Lecture et dénombrement
Dénombrer les colonies de couleur rouge brique caractéristiques des Coliformes Totaux et
des Coliformes fécaux sur le milieu gélosé sélectif Désoxycholate lactose 1‰. Les résultats
sont exprimés en UFC.g
-1 .
Pour E.coli, les tubes positifs sont ceux qui ont formé des anneaux rouges indice de
production de l’indole en dégradant le Tryptophane.
Avec : 1,1 : constante.
d : première dilution retenue.
du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d
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Escherichia coli
Cette bactérie correspond à des coliformes thermo-tolérants qui produisent de l’indole à
partir du tryptophane à 44°C, c’est l’indicateur est le plus spécifique d’une contamination
fécale (Marjorie, 1987).
4.2.3.1.2.
Mode opératoire
- Déposer 1 ml de chaque solution mère et de chaque dilution décimale, dans deux boîtes
de Pétri stériles.
- Ajouter, par incorporation, 15 ml du milieu gélosé sélectif Lactosé au Désoxycholate à
1‰ fondue et ramenée à 47°C.
- Mélanger l’inoculum au milieu par des mouvements de 8 et le laisser solidifier.
- Recouvrir l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche protectrice de 5 ml du milieu
gélosé sélectif Désoxycholate lactose.
- Laisser se solidifier la gélose.
- Incuber, une boîte, à 35°C, pour les Coliformes Totaux et une boîte, à 44°C, pour
les Coliformes Fécaux, durant 48 heures.
- après 48 heures, repiquer, des boites positives, les colonies rouges fluorescentes sous UV
dans de l’eau peptonnée exempte d’indole, puis incuber les tubes à 44°C pendant 24 heures.
- Ajouter quelques gouttes du réactif de Kovacs le 2
èm jour.
4.2.3.1.3.
Lecture et dénombrement
Dénombrer les colonies de couleur rouge brique caractéristiques des Coliformes Totaux et
des Coliformes fécaux sur le milieu gélosé sélectif Désoxycholate lactose 1‰. Les résultats
sont exprimés en UFC.g
-1 .
Pour E.coli, les tubes positifs sont ceux qui ont formé des anneaux rouges indice de
production de l’indole en dégradant le Tryptophane.
Avec : 1,1 : constante.
d : première dilution retenue.
du nbre des colonies des 2 boites retenues
CT =
1,1 . d