Chapitre II : Matériel et méthodes
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Méthode 4
Le protocole optimisé au cours de cette étude à partir du protocole standardisé «ECIMAR» est
le suivant :
Le matériel biologique collecté lyophilisé est réduit en poudre, pesé et conservé au congélateur
à-20°C jusqu’à extraction. Pour chaque analyse, 20 mg environ de matériel biologique sont
extraites avec CH2Cl2/MeOH (1/1 v/v ; 2x 2mL, ultrasons 2x 10min). Après filtration sur coton,
évaporation à sec sous azote et reprise dans 500 Μl de MeOH, chaque extrait est filtré de
nouveau sur filtre seringue ( 0,22 mm ; 1,3 mm) et transvasé dans un vial de 1,5 ml (JascoTM )
avec bouchon à septum pour l’analyse chrommatographique (Croué, 2014).
Nous avons utilisé pour l’étude chromatographique HPLC-UV-DAD la condition2 du protocole
standardisé par « ECIMAR»
Figure condition optimisé des analyse par ECIMAR (Croué, 2014) .
Les analyses sont faite au niveau du laboratoire de contrôle des produit toxiques de l’ institut
criminologie de la gendarmerie national ( bouchaoui)
Conditions expérimentales optimisées selon l’appareil utilisée :
Appareil : HPLC/UV-DAD (Thermo )
Colonne : C18 (150x4,6, 5um)
Éluant ( B) : le méthanol ( MEOH)
Éluant (D) : l’eau (H2O)
Longueur d’onde : 290 nm
Volume d’ injection : 20 uL
Débit :1mL/min