MATERIEL ET METHODES
2019
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IV.3. Techniques d’identifications et de caractérisations de quelques Bactéries :
IV.2.1. Coloration de Gram :
Les bactéries peuvent être groupées en 2 catégories selon la méthode de coloration de Gram. Cette
technique a été mise au point en 1884 par Hans Christian Gram, un bactériologiste danois.
a. Mode opératoire :
• réaliser un frottis et le fixer
• plonger la lame dans le violet de gentiane pendant1 minute ;
• plonger la lame dans une solution de Lugol pendant 1 minute ;
• rincer à l’eau distillée les deux faces de la lame ;
• décolorer dix secondes à l’alcool.
• rincer immédiatement à l’eau distillée.
• plonger la lame dans la safranine (ou la fuchsine) phéniquée pendant 1 minute.
• laver la lame à l’eau distillée.
• sécher la lame en la tamponnant avec du papier Joseph.
• observer à l’objectif x100 à l’immersion.
IV.2.2. Test catalase :
Le test consiste à mettre des bactéries en quantité suffisante en contact de peroxyde
d’hydrogène (H2O2). Si elles possèdent la catalase, elles dégradent le peroxyde d’hydrogène
en eau et dioxygène visible par la formation de bulles.
Technique :
 Déposer sur une lame une goutte d’eau oxygénée (= peroxyde d’hydrogène) à l’aide d’une anse
de platine ou pipette Pasteur ;
 prélever une colonie à l’aide de l’anse ;
 dissocier la colonie dans la goutte.
IV.2.3. Test oxydase :
Le test consiste à mettre en évidence la capacité que possède la bactérie à oxyder un réactif
incolore (la NN-diméthyl-paraphénylène diamine) en un dérivé rose violacé.
NN-diméthyl-paraphénylène diamine
Produit coloré
incolore
oxydation
rose violacé