CHAPITRE II
Matériel et méthodes
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*Durant cette étape, le travail s’est effectué dans l’obscurité et les extraits obtenus ont été
conservés au frais à 4° C dans des ballons enveloppés dans du papier aluminium.
*Les ballons ont été pesés avant et après l’extraction afin de calculer les quantités de pigments
caroténoïdes extraites (TableauII.1).
TableauII.1 : Quantités de pigments caroténoïdes obtenues après l’extraction
Echantillon
Rhodo 1
Rhodo 2
Chromo 1 Chromo 2 Chloro 1
Chloro 2
Poids du
ballon vide
(g)
109.6519
128.1881
137.4693
99.8222
129.9386
107.4369
Poids du
ballon après
extraction
(g)
110.0564
128.3414
137.6551
100.0414
130.5128
107.7712
Quantité de
pigment
extraite (g)
0.4045
0.1533
0.1858
0.2192
0.5742
0.3343
2.2.2.2. Quantification par spectrophotométrie UV-Visible
L’absorbance des extraits pigmentaires précédemment obtenues a été mesurée, à 450 nm qui
correspondent au maximum d’absorbance du β-carotène (RODRIGUEZ-AMAYA, 2001), à
l’aide d’un spectrophotomètre UV-Visible. Pour ce faire, le volume dans les ballons a été ajusté
à 25 ml avec de l’hexane et les échantillons dilués 6 fois. Les concentrations ont été ensuite
calculées à partir de la courbe d’étalonnage d’une solution de bichromate de potassium adaptée
par BENK (1960) et préparée comme suit :
-Dissolution de 0.036g de bichromate de potassium dans 100ml d’eau distillée ; chaque ml de la
solution correspond à 0.0266mg de caroténoïdes totaux calculés comme β-carotène.
-Obtention d’une solution d’une concentration de 26.6 mg /L de caroténoïdes et préparation de
standards aux différentes concentrations : 1 mg/L, 2 mg/L, 5 mg/L, 10 mg/L et 15 mg/L.
-Lecture de l’absorbance de chaque standard contre l’eau distillée (blanc) à 450 nm
-Traçage de la courbe d’étalonnage.