CHAPITRE II. MATÉRIEL ET MÉTHODES
L’absorbance est ensuite mesuré pour chaque solution fille en utilisant le spectrophotomètre UVvisible avec une longueur d’onde ʎ= 665 nm afin de pouvoir tracer la courbe d’étalonnage
A=f(Ce).
La méthode d’analyse utilisée est la spectrophotométrie UV visible qui consiste à une étude des
spectres UV à une longueur d’onde donnée (ʎmax) en nm, réalisé à l’aide d’un spectrophotomètre
et d’une cuve de 1 cm de largeur, nous établissons ainsi la droite d’étalonnage à la longueur
d’onde correspondante au maximum d’adsorption du colorant (pour le bleu de méthylène ʎmax =
665 nm).
II.3.1.3. Spectrophotométrie UV-visible
L’analyse de la spectrophotométrie UV visible est fondée sur l’analyse du changement de la
lumière par milieu (solution) en fonction de la variation de l’élément. Le principe d’analyse est
basé sur la loi de Beer Lambert.
II.3.1.4. Le principe de la loi de Beer-Lambert
Si un faisceau lumineux monochromatique traverse une solution homogène d’une substance de
concentration C contenue dans une cuve de face parallèle sur une longueur I (trajet optique),
nous observons que la fraction de la lumière absorbée est en fonction de la concentration et de
l’épaisseur du milieu (WILLIAMS et FLEMING, 1973 in BOUAZZA, 2012)
Le spectrophotomètre UV visible nous donne l’absorbance de chaque échantillon, ce qui nous
permet de déduire sa concentration à partir de la courbe d’étalonnage qui vérifie la loi de BeerLambert, et ainsi déterminer la quantité de colorant fixé par gramme d’étalonnage.
A= C.I.ɛ
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Avec:
A: absorbance
ɛ: coefficient d’extension molaire (L.mol
-1 .cm
-1 )
L: longueur du trajet (cm
-1 )
C: Concentration de l’élément à dosé (mol.l
-1 )
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