Chapitre III
Matériels et Méthodes
32
- Placer les tubes au réfrigérateur et laisser l'extraction acétonique se poursuivre une nuit.
3.4.3. Centrifugation et la mesure spectroscopique
Placer les tubes dans la centrifugeuse
Centrifuger 1 min, pour faire tomber les fibres de verres.
Centrifuger à nouveau 5 à 10 min a 3000-4000 tr/min (les tubes doivent rester boucher
pour éviter l’évaporation).
3.4.4. Mesure d’absorbance
-Récupérer les tubes et les mettre dans le portoir tout on évitant la lumière.
-Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de spectromètre ; on évite l’entrainement
de fibres de verre en aspirant l’extrait à l’aide, par exemple, d’une seringue de
verre.
-Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
-Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs d’ondes de 665 et 750
nm, soit Ab665na et Ab750na. La mesure à 750 nm doit être restée inférieur à 0,005 par centimètre
de trajet optique.
-Acidifier par addition de 10 μl d’acide chlorhydrique 0,3 mol/l par millilitre d’extrait (Soit une
goute pour environ 5 ml) directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min
-Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm, soit Ab665a etAb750a.
3.5. Calcul et expression des résultats :
Les absorbances brutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doivent être corrigés en
soustrayant les blancs des cuves puis on obtient les absorbances nettes en soustrayant les
absorbances corrigés mesurés à 750 nm des absorbances corrigées mesurées à 665 nm, c’est
à- dire :
Avant acidification :
A665na = (Ab665na - bc665) – (Ab750na –bc750)
Après acidification :
A665a= (Ab665a - bc665) – (Ab750a –bc750)
Les autres données sont :
- V : volume d’eau filtrée (litres).
- v : volume de solvant d’extraction (millilitres).
- l : longueur de trajet optique de la cuve de mesure (centimètre).
La concentration de chlorophylle a est calculée d’après la relation suivante :
Matériels et Méthodes
32
- Placer les tubes au réfrigérateur et laisser l'extraction acétonique se poursuivre une nuit.
3.4.3. Centrifugation et la mesure spectroscopique
Placer les tubes dans la centrifugeuse
Centrifuger 1 min, pour faire tomber les fibres de verres.
Centrifuger à nouveau 5 à 10 min a 3000-4000 tr/min (les tubes doivent rester boucher
pour éviter l’évaporation).
3.4.4. Mesure d’absorbance
-Récupérer les tubes et les mettre dans le portoir tout on évitant la lumière.
-Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve de spectromètre ; on évite l’entrainement
de fibres de verre en aspirant l’extrait à l’aide, par exemple, d’une seringue de
verre.
-Mettre la cuve en place et s’assurer de son positionnement correct.
-Mesurer les absorbances brutes des extraits non acidifiés aux longueurs d’ondes de 665 et 750
nm, soit Ab665na et Ab750na. La mesure à 750 nm doit être restée inférieur à 0,005 par centimètre
de trajet optique.
-Acidifier par addition de 10 μl d’acide chlorhydrique 0,3 mol/l par millilitre d’extrait (Soit une
goute pour environ 5 ml) directement dans la cuve et attendre 2 à 3 min
-Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm, soit Ab665a etAb750a.
3.5. Calcul et expression des résultats :
Les absorbances brutes à 665 nm et les blancs de turbidité à 750 nm doivent être corrigés en
soustrayant les blancs des cuves puis on obtient les absorbances nettes en soustrayant les
absorbances corrigés mesurés à 750 nm des absorbances corrigées mesurées à 665 nm, c’est
à- dire :
Avant acidification :
A665na = (Ab665na - bc665) – (Ab750na –bc750)
Après acidification :
A665a= (Ab665a - bc665) – (Ab750a –bc750)
Les autres données sont :
- V : volume d’eau filtrée (litres).
- v : volume de solvant d’extraction (millilitres).
- l : longueur de trajet optique de la cuve de mesure (centimètre).
La concentration de chlorophylle a est calculée d’après la relation suivante :