Chapitre II : Matériel et méthodes
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La recherche et dénombrement de L. pneumophila a été réalisée par la méthode de filtration
sur membrane (AFNOR, 2014). Cette méthode de concentration est le moyen le plus
couramment utilisé dans les laboratoires, en raison de sa simplicité et sa rapidité. Elle
correspond à une filtration d'un volume d'eau à travers des membranes stériles de porosité de
0,45 µm susceptibles de retenir les bactéries.
Dans la présente étude, un volume de 500 ml d'eau témoin contaminée est filtré pour estimer
la charge bactérienne avant traitement. A la fin de chaque expérience, les volumes traités par
les différentes méthodes de décontamination sont filtrés.
Présentation de l’appareil de filtration sur membrane :
Le dispositif est constitué de 6 postes de filtration simples (Figure 25) qui fonctionnent à basse
pression via une pompe à vide, il contient également un support de filtre sur lequel est placée
la membrane de filtration ainsi que l’entonnoir.
(1) : Support filtre où se place la membrane de filtration + entonnoir
(2) : Bec-bunsen
Figure 25 : Dispositif de l'appareil de filtration sur membrane
Mode opératoire :
Il convient de placer le dispositif entier devant un bec-bunsen et sur une paillasse préalablement
nettoyée à l'eau de javel, de sorte à disposer d'une zone de travail stérile.
- Stériliser le dispositif avec de l'alcool suivi d'un flambage ;
- Assembler les différents constituants du dispositif de filtration ;
- Flamber le support de filtre ;
(1)
(2)