Chapitre II : Matériel et méthodes
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II.5.5. Détermination du degré de déacétylation
II.5.5.1. Mesure par Spectroscopie Infrarouge à Transformation de Fourrier (FTIR)
La spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier est une technique utilisée en chimie
analytique. Elle est considérée comme un outil analytique rapide, non destructif, puissant qui
permet d'étudier la structure et la composition chimique de petites molécules (Abidi, 2021).
Elle est liée à la vibration des liaisons interatomiques. Elle consiste à irradier l'échantillon avec
un rayonnement infrarouge. Lorsque la fréquence du rayonnement correspond à une fréquence
de vibration des molécules exposées, il se produit un phénomène d'absorption. Il en résulte un
pic d'absorption sur le spectre d'absorbance (Ahmed Hared , 2007).
Mode opératoire :
1 mg de poudre des polysaccharides séchés est mélangé avec 130 mg de KBr (Bromure de
potassium). Le mélange est comprimé en un disque de KBr (8 tonnes pendant 5 minutes). La
résolution spectrale est de 4 cm-1 (Sari-Chmayssem, et al., 2019)
Le degré de désacétylation du chitosane a été déterminé par la formule suivante (Brugnerotto,
et al., 2001) :
𝐀 𝟏𝟑𝟐𝟎 /𝐀 𝟏𝟒𝟐𝟎 = 𝟎. 𝟑𝟖𝟐𝟐 + 𝟎. 𝟎𝟑𝟏𝟑𝟑. 𝐃𝐀 avec 𝐃𝐀 = 𝟏𝟎𝟎 − 𝐃𝐃𝐀
Où :
𝐀 𝟏𝟑𝟐𝟎 : l’absorbance au nombre d’onde 1320 cm
-1
correspondant à l’amide III ;
𝐀 𝟏𝟒𝟐𝟎 : l’absorbance au nombre d’onde 1420 cm
-1 correspondant à la déformation symétrique
de CH 3 et CH 2 ;
DA : Degré d’acétylation.
II.6. Revivification de Legionella pneumophila
II.6.1. Préparation de milieu de culture
La culture des légionelles est lente et difficile (jusqu’à 10 jours). Les légionelles sont des
bactéries exigeantes (Jarraud, Girardo, Reyrolle, & Etienne, 2002). Par conséquent, la
préparation du milieu de culture spécifique de Legionella constitue un préalable indispensable
à la revivification de la souche. Le milieu de base des légionelles est autoclavé et le supplément
de croissance BCYE et le supplément sélectif GVPC sont ensuite additionnés. Le supplément
GVPC regroupe un ensemble d'antibiotiques visant à inhiber la croissance des autres types de
bactéries. Une fois le mélange des composants fait, il ne restera plus qu'à couler les boîtes.