Matériel et méthodes
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Mode opératoire :
• Mettre 4 flacons de 250ml contenant le milieu BCYE à fondre dans un bain
marie ;
• Stériliser la paillasse à l’aide d’eau de javel ;
• Allumer les becs bunsen ;
• Préparer un flacon stérile en plastique de 1L ;
• Préparer un nombre suffisant de boites de Petri ;
• Prendre 2 flacons de « legionella growth suplement » ,ajouter dans chacun
d’entre eux 25 ml d’eau distillée ;
• Prendre 2 flacons de « legionella selective suplement » ,ajouter dans chacun
d’entre eux 10ml d’eau distillée ;
• Une fois le milieu à l’état liquide ,le retirer et le laisser refroidir légèrement
sous l’eau courante ;
• Verser 2 flacons contenant le milieu BCYE dans le flacon sterile , y ajouter les
2 flacons du growth supplement ainsi que les deux du selective supplement ;
• Refermer le flacon et bien agiter ;
• Compléter à l’aide des deux flacons qui restent jusqu’à atteindre 1L ;
• Couler les boites ;
• Flamber chaque boite avant de la refermer pour eliminer les bules d’air ;
• Laisser le milieu se solidifier.
II.6.1.2. La revivification (Figure 17)
• Décongeler un tube de conservation contenant une suspension préalablement
ensemencée avec Legionella pneumophila ATCC 33152 ;
• Vortexer le tube pour uniformiser la suspension ;
• A l’aide d’une pipete Pasteur stérilisée, prélever une goutte de la suspension ;
• Ensemencer en surface sur le milieu BCYE en utilisant la méthode de
l’épuisement de la goute ;
• Incuber à 37 °C, son temps de croissance peut aller jusqu’à 10 jours.
Figure 17. Schéma représentatif de l'ensemencement par épuisement.