Chapitre Ⅲ : matériel et méthodes
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aqueuse et organique ce qui conduit à une biodisponibilité accrue et à la biodégradation des
hydrocarbures (Batista et al., 2006).
III.7.1 Drop collapse test
Le drop collapse test ou test d’effondrement des gouttes a été réalisé en ajoutant 7 μl de pétrole
brut dans chaque puits d’une plaque microtitre à 96 puits. Le couvercle a été équilibré pendant 1
heure à température ambiante, puis 20 μl de culture bactérienne de chaque isolat ont été ajoutés à
la surface du pétrole. Après une minute d'incubation, la forme de la goutte à la surface du pétrole
a été observée. Si la goutte s’effondre, elle indique la présence de surfactant (résultat positif) ; si
elle reste perlée, ceci indique l'absence de surfactant (réponse négative). L'eau distillée stérile a
été utilisée comme contrôle négatif (Bodour et Miller-Maier, 1998 ; Mahjoubi et al., 2013).
Figure Ⅲ.10. Schéma du test d’effondrement de la goutte. Le liquide testé (jaune) est mis en
contact avec une goutte de pétrole (bleu). Soit les deux se mélangent (en haut) soit les deux
restent distincts (bas)
III.7.2 Indice d’émulsification E24
L'indice d'émulsification (E24) de différentes cultures bactériennes a été déterminé en ajoutant 3
ml d’éther de pétrole au même volume de culture bactérienne. Le mélange a été agité
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aqueuse et organique ce qui conduit à une biodisponibilité accrue et à la biodégradation des
hydrocarbures (Batista et al., 2006).
III.7.1 Drop collapse test
Le drop collapse test ou test d’effondrement des gouttes a été réalisé en ajoutant 7 μl de pétrole
brut dans chaque puits d’une plaque microtitre à 96 puits. Le couvercle a été équilibré pendant 1
heure à température ambiante, puis 20 μl de culture bactérienne de chaque isolat ont été ajoutés à
la surface du pétrole. Après une minute d'incubation, la forme de la goutte à la surface du pétrole
a été observée. Si la goutte s’effondre, elle indique la présence de surfactant (résultat positif) ; si
elle reste perlée, ceci indique l'absence de surfactant (réponse négative). L'eau distillée stérile a
été utilisée comme contrôle négatif (Bodour et Miller-Maier, 1998 ; Mahjoubi et al., 2013).
Figure Ⅲ.10. Schéma du test d’effondrement de la goutte. Le liquide testé (jaune) est mis en
contact avec une goutte de pétrole (bleu). Soit les deux se mélangent (en haut) soit les deux
restent distincts (bas)
III.7.2 Indice d’émulsification E24
L'indice d'émulsification (E24) de différentes cultures bactériennes a été déterminé en ajoutant 3
ml d’éther de pétrole au même volume de culture bactérienne. Le mélange a été agité