ANNEXES 1
Annexe 1.1. Dosage de la Chlorophylle a par méthode spectrophotométrie
La méthode par spectrophotométrie consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera
ensuite immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on mesure l’absorbance
avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
•Les échantillons d’eau (1000 à 2000 ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de verre
(Wattman GF/F, diamètre 47 mm).
•Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de l’échantillon et la
date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
•L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen (1967) in (Aminot
et Chaussepied, 1983).
•Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes en verre
contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier aluminium et sont
immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24 heures.
•L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (Ana) et après
acidification (Aa) avec 10 μl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
•Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs d’ondes 665 mm
et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de Lorenzen (1967):
[
]
V: volume d’eau filtrée (l)
v: volume de solvant d’extraction (ml)
l: longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm)
A
na
665 : absorbance nette corrigée (avant acidification
A
a
665 : absorbance nette corrigée (après acidification)
Annexe 1.1. Dosage de la Chlorophylle a par méthode spectrophotométrie
La méthode par spectrophotométrie consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera
ensuite immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on mesure l’absorbance
avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
•Les échantillons d’eau (1000 à 2000 ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de verre
(Wattman GF/F, diamètre 47 mm).
•Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de l’échantillon et la
date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
•L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen (1967) in (Aminot
et Chaussepied, 1983).
•Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes en verre
contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier aluminium et sont
immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24 heures.
•L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (Ana) et après
acidification (Aa) avec 10 μl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
•Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs d’ondes 665 mm
et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de Lorenzen (1967):
[
]
V: volume d’eau filtrée (l)
v: volume de solvant d’extraction (ml)
l: longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm)
A
na
665 : absorbance nette corrigée (avant acidification
A
a
665 : absorbance nette corrigée (après acidification)