Chapitre II
Matériel et méthodes
18
2.3.1.4. Reproduction maximale par jour (Ri)
C’est le nombre maximum d’ovocytes émis dans une année (365 jours) par les femelles, pour le
calculer il nous faut une étude de fécondité absolue.
La fécondité absolue correspond au nombre d’ovocytes matures contenus dans l’ovaire d’une
femelle à la veille de la ponte (Kartas and Quignard, 1984). Cependant, les problèmes de
l'évaluation de la fécondité dépendent de plusieurs facteurs
• Le nombre absolu d'œufs produits ;
• Si l'espèce est un reproducteur total ou partiel et donc du degré de différenciation qui existe
entre la taille des œufs qui seront pondus cette saison et les œufs immatures présents qui
seront reportés à la prochaine saison de ponte.
P. lascaris appartiennent au type de reproducteurs totaux, cela est confirmée à partir des
distributions des fréquences du diamètre ovocytaire.
Le comptage des ovocytes a été réalisé à l’aide d’une loupe binoculaire équipée d’une caméra
reliée par carte d’acquisition vidéo à un ordinateur disposant du logiciel d’analyse d’images
TSView (version 6.2.3.5. Tucsen) (Figure II.2). Le champ de vision de la loupe binoculaire, affiché
à l’écran, est alors numérisé. Chaque grossissement utilisé (grossissement Gx 2) est calibré avec
une lame micrométrique.
Plusieurs méthodes de comptage par sous-échantillonnage sont proposées par Aboussouan et
Lahaye (1979) : échantillonnage par surface, gravimétrique et volumétrique. Le comptage des
ovocytes s’est réalisé selon la méthode d’échantillonnage par volume de (Bagenal, 1957).
Les ovaires ont été conservés dans une solution de conservation et de dissociation de Gilson
(Stéquert and Ramcharrun, 1995), ceci afin de dilacérer les ovaires pour en faciliter la séparation
des ovocytes.
Les ovocytes sont placés dans un bécher et le volume est ramené à 200 ml (V). Pendant qu’une
agitation continue maintient les ovocytes en suspension homogène dans ce mélange ovocytesliquide de Gilson, deux sous-échantillons (v) sont prélevés et mis à sédimenter, chacun dans une
cuve Dollfus comportant 200 cases. Le volume (v) utilisé est de 20 ml. Pour chaque souséchantillon, le comptage sous loupe binoculaire s’effectue sur 10 cases de la cuv, prises au hasard.
Le nombre moyen (n) des deux sous-échantillons permet de calculer la fécondité absolue à partir
de la formule :
í µí°¹ = í µí± í µí±¥ 20 í µí±¥
í µí±
v
Pour chaque femelle, on calcule la fécondité moyenne entre les trois essais de chaque femelle.
Matériel et méthodes
18
2.3.1.4. Reproduction maximale par jour (Ri)
C’est le nombre maximum d’ovocytes émis dans une année (365 jours) par les femelles, pour le
calculer il nous faut une étude de fécondité absolue.
La fécondité absolue correspond au nombre d’ovocytes matures contenus dans l’ovaire d’une
femelle à la veille de la ponte (Kartas and Quignard, 1984). Cependant, les problèmes de
l'évaluation de la fécondité dépendent de plusieurs facteurs
• Le nombre absolu d'œufs produits ;
• Si l'espèce est un reproducteur total ou partiel et donc du degré de différenciation qui existe
entre la taille des œufs qui seront pondus cette saison et les œufs immatures présents qui
seront reportés à la prochaine saison de ponte.
P. lascaris appartiennent au type de reproducteurs totaux, cela est confirmée à partir des
distributions des fréquences du diamètre ovocytaire.
Le comptage des ovocytes a été réalisé à l’aide d’une loupe binoculaire équipée d’une caméra
reliée par carte d’acquisition vidéo à un ordinateur disposant du logiciel d’analyse d’images
TSView (version 6.2.3.5. Tucsen) (Figure II.2). Le champ de vision de la loupe binoculaire, affiché
à l’écran, est alors numérisé. Chaque grossissement utilisé (grossissement Gx 2) est calibré avec
une lame micrométrique.
Plusieurs méthodes de comptage par sous-échantillonnage sont proposées par Aboussouan et
Lahaye (1979) : échantillonnage par surface, gravimétrique et volumétrique. Le comptage des
ovocytes s’est réalisé selon la méthode d’échantillonnage par volume de (Bagenal, 1957).
Les ovaires ont été conservés dans une solution de conservation et de dissociation de Gilson
(Stéquert and Ramcharrun, 1995), ceci afin de dilacérer les ovaires pour en faciliter la séparation
des ovocytes.
Les ovocytes sont placés dans un bécher et le volume est ramené à 200 ml (V). Pendant qu’une
agitation continue maintient les ovocytes en suspension homogène dans ce mélange ovocytesliquide de Gilson, deux sous-échantillons (v) sont prélevés et mis à sédimenter, chacun dans une
cuve Dollfus comportant 200 cases. Le volume (v) utilisé est de 20 ml. Pour chaque souséchantillon, le comptage sous loupe binoculaire s’effectue sur 10 cases de la cuv, prises au hasard.
Le nombre moyen (n) des deux sous-échantillons permet de calculer la fécondité absolue à partir
de la formule :
í µí°¹ = í µí± í µí±¥ 20 í µí±¥
í µí±
v
Pour chaque femelle, on calcule la fécondité moyenne entre les trois essais de chaque femelle.