96_____________________________________Biochimie clinique
Le taux de calcium ionisé est variable en fonction du pH, et il est préférable
de faire un prélèvement en anaérobiose pour éviter tout changement de pH par
perte de CO^.
5.3. Dosage du calcium urinaire
Si les techniques sont les mêmes que pour le sang, il est cependant nécessaire
d'effectuer le recueil dans un récipient contenant de l'acide chlorhydrique 1M
pour acidifier les urines ce qui permet la dissolution des sels et des complexes
que le calcium peut contracter avec des anions comme les phosphates ou les
oxalates. L'homogénéisation des urines est indispensable avant tout prélèvement
d'un aliquot pour analyse.
5.4. Dosage des phosphates inorganiques sanguins et urinaires
Ces techniques utilisent presque toutes (à l'exception des méthodes enzymatiques) un reactif molybdique. En présence de ce réactif et en milieu acide l'ion
phosphate donne un phosphomolybdate de coloration bleue instable.
5.4.1. Réduction du phosphomolybdate
Le phosphomolybdate réduit va donner une coloration stable pendant au
moins 30 mn et permet une lecture photométrique à 660 nm.
Les réducteurs les plus utilisés sont le sulfate ferreux et l'hydroxylamine.
5.4.2. Colorimétrie directe du phosphomolybdate
L'instabilité de la coloration n'est plus un facteur critique avec les appareillages modernes dans lesquels les calibrateurs et les spécimens sont traités
exactement dans les mêmes conditions. L'apparition de la coloration est suivie
dans ces conditions à 340 nm.
5.4.3. Colorimétrie du phosphovanadomolybdate
Les ions phosphates en présence de molybdate et de vanadate en milieu acide
vont donner une coloration jaune dont le pic d'absorption est à 360 nm. Cette
technique est peu employée.
5.4.4. Méthodes enzymatiques
Plusieurs techniques ont été proposées, la plus récente est détaillée dans le
schéma suivant.
Le taux de calcium ionisé est variable en fonction du pH, et il est préférable
de faire un prélèvement en anaérobiose pour éviter tout changement de pH par
perte de CO^.
5.3. Dosage du calcium urinaire
Si les techniques sont les mêmes que pour le sang, il est cependant nécessaire
d'effectuer le recueil dans un récipient contenant de l'acide chlorhydrique 1M
pour acidifier les urines ce qui permet la dissolution des sels et des complexes
que le calcium peut contracter avec des anions comme les phosphates ou les
oxalates. L'homogénéisation des urines est indispensable avant tout prélèvement
d'un aliquot pour analyse.
5.4. Dosage des phosphates inorganiques sanguins et urinaires
Ces techniques utilisent presque toutes (à l'exception des méthodes enzymatiques) un reactif molybdique. En présence de ce réactif et en milieu acide l'ion
phosphate donne un phosphomolybdate de coloration bleue instable.
5.4.1. Réduction du phosphomolybdate
Le phosphomolybdate réduit va donner une coloration stable pendant au
moins 30 mn et permet une lecture photométrique à 660 nm.
Les réducteurs les plus utilisés sont le sulfate ferreux et l'hydroxylamine.
5.4.2. Colorimétrie directe du phosphomolybdate
L'instabilité de la coloration n'est plus un facteur critique avec les appareillages modernes dans lesquels les calibrateurs et les spécimens sont traités
exactement dans les mêmes conditions. L'apparition de la coloration est suivie
dans ces conditions à 340 nm.
5.4.3. Colorimétrie du phosphovanadomolybdate
Les ions phosphates en présence de molybdate et de vanadate en milieu acide
vont donner une coloration jaune dont le pic d'absorption est à 360 nm. Cette
technique est peu employée.
5.4.4. Méthodes enzymatiques
Plusieurs techniques ont été proposées, la plus récente est détaillée dans le
schéma suivant.