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Utiliser un microscope photonique
et un stéréomicroscope fiche 101
Divers instruments optiques sont employés pour l'étude de l'organisation anatomique et histologique
d'un organisme animal. Ils ont la propriété de fournir une image agrandie de l'objet examiné. Le rapport
entre les dimensions de l'image obtenue et les dimensions réelles de l'objet correspond au grossissement.
La distance minimale entre deux points de l'objet permettant d'en obtenir deux images distinctes est
appelée limite de séparation (fiche 91 ). L'épaisseur maximale de la tranche d'espace dans laquelle tous
les points donnent une image nette est définie comme la profondeur de champ. Elle diminue avec l'augmentation du grossissement.
Figure 1. Le microscope photonique: un instrument transmettant la lumière et formant une
image agrandie Le microscope photonique est composé d'un statif représenté par un pied accueillant
le système d'éclairement et une potence supportant un tube optique, une platine porte-objet et un
dispositif de mise au point. Le tube optique porte deux oculaires à rôle de loupes, dont l'écartement
est réglable. La platine porte-objet comporte un trou central laissant passer la lumière. La lame y est
déposée, et peut être déplacée grâce à la sur-platine mobile dans deux directions perpendiculaires. Le
dispositif de mise au point est représenté par deux vis, macrométrique et micrométrique. Une tourelle
porte -objectifs est située au -dessus de la platine et permet de mettre en place l'objectif choisi, qui fournit
une image agrandie. Sous la platine est situé un condenseur concentrant les rayons lumineux, ainsi
qu'un diaphragme dont le degré d'ouverture détermine la quantité de lumière traversant la préparation.
Le grossissement total des microscopes photoniques courants est compris entre 40 et l 000 et leur
limite de séparation est de l'ordre de 0,2 µm. À titre de comparaison, la limite de séparation de l'œil
humain est de l OO µm.
De bonnes conditions d'observation au microscope photonique requièrent la mise en œuvre de plusieurs
étapes :
- la mise sous tension du système d'éclairement et l'ouverture du diaphragme ;
- la mise en place de la lame sur la platine, lamelle sur le dessus ;
- le positionnement de l'objectif de plus faible grandissement et la mise au point grossière ;
- le réglage de l'intensité d'éclairement;
- l'ajustement de l'écartement interpupillaire ;
- la mise au point fine;
- le réglage de la compensation (correction de la différence d'acuité visuelle entre les deux yeux);
- le choix de la hauteur du condenseur (focalisation du faisceau lumineux) et le degré d'ouverture du
diaphragme.
L'observation débute généralement avec l'objectif de plus faible grandissement et est affinée avec les
objectifs de grandissements croissants. Du fait de leur synchronisation, seul un léger ajustement de la
mise au point est nécessaire lors du passage d'un objectif au suivant. L'objectif de plus fort grandissement requiert le plus souvent le dépôt d'une goutte d'huile à immersion sur la préparation pour la mise
au point.
Oculaires et objectifs doivent être soigneusement nettoyés au terme de l'observation, de même que le
corps du microscope.
Figure 2. Le stéréomicroscope : un instrument formant une image agrandie en relief Le
stéréomicroscope est formé d'un statif comprenant un pied, éventuellement muni d'un dispositif
d'éclairement par transmission, et d'une potence. Elle supporte le corps, le tube optique et le système de
mise au point, ainsi que parfois un dispositif d'éclairement par réflexion. Le corps du stéréomicroscope
comporte un objectif central, associé à des lentilles permettant de moduler le grossissement de manière
continue. Deux oculaires faisant office de loupes sont présents sur le tube optique. Le dispositif de mise
au point est représenté par deux vis, macrométrique et micrométrique.
Le grossissement total des stéréomicroscopes courants varie de 8 à 60 le plus souvent, alors que leur
limite de séparation est d'environ 2 µm.
Figures 3. et 4. Le sac scrotal et le spermiducte de la Souris: observations au stéréomicroscope
et au microscope photonique
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Utiliser un microscope photonique
et un stéréomicroscope fiche 101
Divers instruments optiques sont employés pour l'étude de l'organisation anatomique et histologique
d'un organisme animal. Ils ont la propriété de fournir une image agrandie de l'objet examiné. Le rapport
entre les dimensions de l'image obtenue et les dimensions réelles de l'objet correspond au grossissement.
La distance minimale entre deux points de l'objet permettant d'en obtenir deux images distinctes est
appelée limite de séparation (fiche 91 ). L'épaisseur maximale de la tranche d'espace dans laquelle tous
les points donnent une image nette est définie comme la profondeur de champ. Elle diminue avec l'augmentation du grossissement.
Figure 1. Le microscope photonique: un instrument transmettant la lumière et formant une
image agrandie Le microscope photonique est composé d'un statif représenté par un pied accueillant
le système d'éclairement et une potence supportant un tube optique, une platine porte-objet et un
dispositif de mise au point. Le tube optique porte deux oculaires à rôle de loupes, dont l'écartement
est réglable. La platine porte-objet comporte un trou central laissant passer la lumière. La lame y est
déposée, et peut être déplacée grâce à la sur-platine mobile dans deux directions perpendiculaires. Le
dispositif de mise au point est représenté par deux vis, macrométrique et micrométrique. Une tourelle
porte -objectifs est située au -dessus de la platine et permet de mettre en place l'objectif choisi, qui fournit
une image agrandie. Sous la platine est situé un condenseur concentrant les rayons lumineux, ainsi
qu'un diaphragme dont le degré d'ouverture détermine la quantité de lumière traversant la préparation.
Le grossissement total des microscopes photoniques courants est compris entre 40 et l 000 et leur
limite de séparation est de l'ordre de 0,2 µm. À titre de comparaison, la limite de séparation de l'œil
humain est de l OO µm.
De bonnes conditions d'observation au microscope photonique requièrent la mise en œuvre de plusieurs
étapes :
- la mise sous tension du système d'éclairement et l'ouverture du diaphragme ;
- la mise en place de la lame sur la platine, lamelle sur le dessus ;
- le positionnement de l'objectif de plus faible grandissement et la mise au point grossière ;
- le réglage de l'intensité d'éclairement;
- l'ajustement de l'écartement interpupillaire ;
- la mise au point fine;
- le réglage de la compensation (correction de la différence d'acuité visuelle entre les deux yeux);
- le choix de la hauteur du condenseur (focalisation du faisceau lumineux) et le degré d'ouverture du
diaphragme.
L'observation débute généralement avec l'objectif de plus faible grandissement et est affinée avec les
objectifs de grandissements croissants. Du fait de leur synchronisation, seul un léger ajustement de la
mise au point est nécessaire lors du passage d'un objectif au suivant. L'objectif de plus fort grandissement requiert le plus souvent le dépôt d'une goutte d'huile à immersion sur la préparation pour la mise
au point.
Oculaires et objectifs doivent être soigneusement nettoyés au terme de l'observation, de même que le
corps du microscope.
Figure 2. Le stéréomicroscope : un instrument formant une image agrandie en relief Le
stéréomicroscope est formé d'un statif comprenant un pied, éventuellement muni d'un dispositif
d'éclairement par transmission, et d'une potence. Elle supporte le corps, le tube optique et le système de
mise au point, ainsi que parfois un dispositif d'éclairement par réflexion. Le corps du stéréomicroscope
comporte un objectif central, associé à des lentilles permettant de moduler le grossissement de manière
continue. Deux oculaires faisant office de loupes sont présents sur le tube optique. Le dispositif de mise
au point est représenté par deux vis, macrométrique et micrométrique.
Le grossissement total des stéréomicroscopes courants varie de 8 à 60 le plus souvent, alors que leur
limite de séparation est d'environ 2 µm.
Figures 3. et 4. Le sac scrotal et le spermiducte de la Souris: observations au stéréomicroscope
et au microscope photonique
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