11 • Fluorimétrie et chimiluminescence
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Le luminol, dont la chimiluminescence en présence de peroxyde d’hydrogène peut être
également catalysée par la peroxydase du radis noir (HRP, horseradish peroxidase), a trouvé
une application dans la mise au point de tests ELISA (cf. § 17.7). L’intensité lumineuse
qui apparaît, stable durant quelques minutes, rend la méthode extrêmement sensible pour
effectuer des dosages sur une gamme étendue de concentrations, peu habituelle pour ce
genre de tests.
Chimiluminescence et enzymologie. Certains réactifs spécialement préparés libèrent
sous l’action d’un enzyme spécifique des intermédiaires instables dont la décomposition
est accompagnée d’une émission de lumière. On peut ainsi quantifier avec précision les
phosphatases alcalines ou la beta-galactosidase.
QUELQUES SITES SUR INTERNET
www.moleculardevices.com
www.biotek.com
www.omnilab.ch
www.thermo.com
www.perkinelmer.com
www.varianinc.com
www.tecan.com
EXERCICES
Solutions en fin d’ouvrage
Exercice 11.1
Le fer ferreux catalyse l’oxydation du luminol par le peroxyde d’hydrogène. L’intensité de
la chimiluminescence qui en suit croît linéairement avec la concentration du Fe(II) dans
la plage allant de 10
−10 à 10
−8 M. Pour doser une solution de concentration inconnue en
fer(II), on en prélève 2 mL et on ajoute 1 mL d’eau ainsi que 2 mL de peroxyde d’hydrogène
dilué et enfin 1 mL d’une solution alcaline de luminol.
Le signal de luminescence émis, intégré sur une période de 10 s, est de 16,1 (unités arbitraires). Dans un second essai on prélève 2 mL de la solution inconnue en fer(II), et on y
ajoute 1 mL d’une solution à 5,15 × 10
−5 M en fer(II) ainsi que les mêmes quantités de peroxyde d’hydrogène et de luminol que dans l’essai précédent. Le signal est de 29,6 (mêmes
unités).
Calculer la concentration molaire en fer(II) dans la solution à doser.
Exercice 11.2
Une solution de 9-aminoacridine dans l’eau, conduit à une intensité de fluorescence qui,
mesurée à 456 nm, est de 60 % par rapport à un témoin de fluorescence externe. Un échantillon de ce composé dont la concentration est de 0,1 ppm dans le même solvant, conduit,
dans les mêmes conditions, à une fluorescence de 40 % (l’eau présente une fluorescence
négligeable).
Calculer la valeur de la concentration de l’échantillon en ppb.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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Le luminol, dont la chimiluminescence en présence de peroxyde d’hydrogène peut être
également catalysée par la peroxydase du radis noir (HRP, horseradish peroxidase), a trouvé
une application dans la mise au point de tests ELISA (cf. § 17.7). L’intensité lumineuse
qui apparaît, stable durant quelques minutes, rend la méthode extrêmement sensible pour
effectuer des dosages sur une gamme étendue de concentrations, peu habituelle pour ce
genre de tests.
Chimiluminescence et enzymologie. Certains réactifs spécialement préparés libèrent
sous l’action d’un enzyme spécifique des intermédiaires instables dont la décomposition
est accompagnée d’une émission de lumière. On peut ainsi quantifier avec précision les
phosphatases alcalines ou la beta-galactosidase.
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EXERCICES
Solutions en fin d’ouvrage
Exercice 11.1
Le fer ferreux catalyse l’oxydation du luminol par le peroxyde d’hydrogène. L’intensité de
la chimiluminescence qui en suit croît linéairement avec la concentration du Fe(II) dans
la plage allant de 10
−10 à 10
−8 M. Pour doser une solution de concentration inconnue en
fer(II), on en prélève 2 mL et on ajoute 1 mL d’eau ainsi que 2 mL de peroxyde d’hydrogène
dilué et enfin 1 mL d’une solution alcaline de luminol.
Le signal de luminescence émis, intégré sur une période de 10 s, est de 16,1 (unités arbitraires). Dans un second essai on prélève 2 mL de la solution inconnue en fer(II), et on y
ajoute 1 mL d’une solution à 5,15 × 10
−5 M en fer(II) ainsi que les mêmes quantités de peroxyde d’hydrogène et de luminol que dans l’essai précédent. Le signal est de 29,6 (mêmes
unités).
Calculer la concentration molaire en fer(II) dans la solution à doser.
Exercice 11.2
Une solution de 9-aminoacridine dans l’eau, conduit à une intensité de fluorescence qui,
mesurée à 456 nm, est de 60 % par rapport à un témoin de fluorescence externe. Un échantillon de ce composé dont la concentration est de 0,1 ppm dans le même solvant, conduit,
dans les mêmes conditions, à une fluorescence de 40 % (l’eau présente une fluorescence
négligeable).
Calculer la valeur de la concentration de l’échantillon en ppb.
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit