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Partie 1 • Méthodes séparatives
H
C
R
C O 2 H
NH 2
O
O
O
O
O
O
OH
OH
OH
O
O
O
O
O
O
OH
OH
OH
OH
H
OH
O
O
COOH
COOO
+
ninhydrine
hydrindantine
un amino-acide secondaire
N
HN
N
- NH
- NH
3
3 ninhydrine
+ produits
+
violet de Ruhemann
λ
ε,
abs : 570 nm ( 20000)
λ abs : 440 nm (jaune)
130°C
130°C
1min
1min
+
chromatographe
ionique
ninhydrine
(TRIONE )
®
R C CO 2 H
H
NH 3
+
+
+
Li
+
+
NH3
C CO 2 H
H
R
SO 3
-
Li
+
SO 3
-
Détecteur spectrophot.
à 570 et 440 nm
réacteur
Figure 4.11 Analyse des acides aminés.
Réaction d’échange sur la colonne et réactions de dérivation avec la ninhydrine.
Quel que soit l’acide aminé de départ, R désignant le reste de la molécule sous forme
non-explicite, il se forme le violet de Ruhemann, dont le maximum d’absorption est à
570 nm. L’hydrindantine qui se forme par couplage de 2 molécules de ninhydrine est
un catalyseur de la réaction. Une alternative consiste à transformer chaque amino-acide
en un dérivé fluorescent de l’indole en présence d’aldéhyde o−phtallique et d’un dérivé
du thio-éthanol.
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