Chapitre II : Matériels et méthodes
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II.4.3.4.Dénombrement des bactéries sulfito-réducteurs selon la Norme (NF EN 26461-2 ISO 64612).
Le dénombrement des bactéries sulfito-réducteurs est basé sur la rétention des spores de bactéries
sur le filtre de porosité 0,22 µm, après destruction des formes végétatives par chauffage de
l’’’haatilloo à ± 5°C (bain-marie) pendant 15 min.
Incubation de la membrane sur milieu gélose viande-foie (ou milieu gélose tryptose sulfite)
additioooo d’uue aapoule de sulfite de sodiuu et uue aapoule d’aluu de fee peedaat ± 4h et 44 ±
4h 37°C.
Dénombrement des colonies noires. Cette coloration est dus à la réduction des sulfites par action des
bactéries, ces sulfures réagissent avec le fer et donnent la couleur noire (NF EN 26461-2 ISO 6461-2).
A. Appareillage utilisé pour la filtration :
 Boite de pétri, diamètre 55 mm stériles, à usage unique.
 Membranes de filtration stériles de 0.22 µm de porosité.
 Rampe de filtration en acier inoxydable stérilisée à la flamme avant chaque analyse.
 Pinces.
 Etuve à 37 +- 1°C.
 Baii d’eau heeeostatt aii aaiee.
 Bec bunsen.
 Trompe à vide.
B. Milieux de culture et réactifs (Norme NF EN 26461-2 ISO 6461-2):
 Gélose base Viande-foie (ou par défaut Gélose Tryptose-Sulfite).
 Additif Alun de fer.
 Additif Sulfite de sodium.
C. Préparation du milieu de culture :
 Utiliser un bain marie à une température de 100°C.
 Faire fondre le flacon contenant la gélose stérile.
 Laisser refroidir à une température de 50°C.
 Rajouter les additifs.
 Maiiteeii le ilieu ooplet au aii aaie à °C jussu’à utilisatioo.