Matériels et méthodes
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Les bactéries réceptrices ayant acquis le(s) caractère(s) de résistance aux antibiotiques
transférables, seront sélectionnées et testées par antibiogramme afin de déterminer leur
profil d’antibio-résistances.
Technique
 La conjugaison a été effectuée en milieu solide
 Cultiver la donatrice et la réceptrice dans un bouillon BHIB pendant 24h à 37°C.
 Assurer un contact entre les deux souches bactériennes de la manière suivante:
Mélanger 2 ml de la réceptrice avec 1 ml de la donatrices dans un tube à essai
stérile.
 Déposer 04 spots du mélange de 50 μl chacun.
 Laisser sécher puis incubé à 37 °C pendant 24h.
 Récupérer un spot dans 5ml d’eau physiologique et ensemencer les boites de sélection
par la suspension bactériennes et les souches parentales (figure 19)
 Après incubation de 24h à 37°C, récupérer les transconjugants sur les boîtes de
sélection où seules les transconjugants ont poussé
 Les transconjugants obtenus seront analysés par antibiogramme
 Les boîtes de sélection ont été préparées comme suit :
- 1ml d’une solution fille de l’azide de sodium pour obtenir une concentration
finale de 200µg/ml.
- 1 ml d’une solution fille d’amoxicilline ou de ciprofloxacine qui nous donne
une cencentration finale respectivement de 25 et 2µg/ml
- 18ml du Mueller Hinton
Figure (19): Ensemencement des transconjuguants et des souches parentales sur une boite
de sélection. Agents de sélection sont : l’azide de sodium 200µg/ml et amoxicilline 25 µg/ml.